Аглютинація еритроцитів при вірусних інфекціях

Аглютинація еритроцитів при вірусних інфекціях виявляється або в результаті прямого взаємодії вірусу з поверхнею еритроцитів (реакція гемаглютинації - РДА), або внаслідок взаємодії з противірусної імунної сироваткою еритроцитів, попередньо сенсибілізованих вірусним антигеном (реакція непрямої або пасивної гемаглютинації - РНГА, РПГА). Аглютинація слід за адсорбцією вірусу або його антигену на поверхні нативних або формалинизированных еритроцитів. РДА настає безпосередньо в суміші гемагглютинирующего вірусу з еритроцитами. Стабільність аглютинації залежить від наявності або відсутності в складі віріона рецептор-деструирующего ензиму, швидко руйнує при t° 37° вірусні рецептори на поверхні еритроцитів, внаслідок чого настає элюция (звільнення) вірусу і розклеювання еритроцитів. Повільна спонтанна элюция настає на холоді. Після елюції еритроцити не агглютинируются вірусами тих же серотипів, але агглютинируются схожими вірусами інших серотипів, що дозволило розташувати мікс - та ЕСНО-віруси в певному порядку (рецепторний градієнт). РДА може бути нейтралізована, якщо перед взаємодією з еритроцитами до гемагглютинирующему вірусу додати специфічну імунну сироватку (реакція гальмування, затримка гемаглютинації - РГГА, РЗГА).
РДА та РТГА вперше були запропоновані для виявлення вірусу грипу і титрування протигрипозних антитіл [Хьорст (G. К. Hirst)]. Незабаром з'явилися повідомлення про гемагглютинирующей активності вірусів осповакцины, эктромелии, помилкової чуми курей, паротиту, віспи, пневмонії мишей, кору, арбо-, адено - і парагрипозних, а також кишкових вірусів. Міксовіруси агглютинируют еритроцити багатьох видів тварин і птахів, віруси віспи та вакцини - еритроцити півнів, арбовіруси і вірус кору - еритроцити мавп і гусей, більшість неполиомиелитных кишкових вірусів - еритроцити людини.
По здатності агглютинировать еритроцити мавп і щурів аденовіруси були розділені на три групи. Вірусний гемаглютинін (ГА) є специфічним антигеном. ГА у миксовирусов (v-антиген) і вірусів ECHO входить до складу віріона. У аденовірусів ГА виявлений у вільному стані. У вірусу осповакцины і арбовируса описані як розчинна, так і пов'язаний з виріоном ГА. Антигенні властивості ГА широко використовують для серологічної класифікації вірусів. За допомогою імунної сироватки в РГГА встановлено 11 підтипів вірусу грипу типу А, патогенних для людини, тварин і птахів, понад 20 груп арбовірусів, патогенних для людини і тварин. ГА різних вірусів володіють різною стійкістю до нагріванню, дії формаліну та інших фізичних і хімічних факторів.
Виявлення феномену гемаглютинації (див.) пов'язане з підбором оптимальних умов культивування вірусів і постановки реакції. Результати РДА залежать від виду еритроцитів, рН середовища, концентрації електролітів, температури, часу інкубації суміші вірусу з еритроцитами. Для оцінки специфічності РГГА велике значення має усунення неспецифічних інгібіторів гемаглютинації і неспецифічних гемагглютининов, присутніх в сироватках людини і тварин. Неспецифічні інгібітори видаляють, прогріваючи сироватки при t° 56° протягом 30 хв. з подальшою обробкою CO2, KJO4, каоліном, або за допомогою рецептор-деструирующего ензиму, що виробляється холерним вібріоном. Неспецифічні гемаглютиніни видаляють шляхом абсорбції сироваток еритроцитів. Специфічність РГГА підвищується при додаванні до суміші вірусу з імунною сироваткою кофактора (нативна нормальна сироватка). ГА накопичується в аллантоисной рідини при розмноженні вірусу в курячому ембріоні, або в рідкій фазі середовища при вирощуванні в культурі тканини.
Про розмноження гемагглютинирующих вірусів у клітинах одношарової культури тканини можна судити по наявності реакції гемадсорбции (РГадс). Ця реакція заснована на аглютинації еритроцитів вірусом, що знаходяться на поверхні клітини. РГадс стає позитивною ще до появи ГА в рідкій фазі культури і до розвитку цитопатических змін в інфікованих клітинах. Специфічність РГадс визначається її гальмуванням за допомогою імунних сироваток.
РНГА з використанням нативних еритроцитів виявилася специфічної при помилковій чумі курей, паротиті, деяких парагрипозних інфекціях, однак при грипі були отримані неспецифічні результати. Еритроцити, оброблені вірусом грипу, набували здатність агглютинироваться будь імунними і нормальними сироватками (панагглютинация). Специфічні результати були досягнуті при сенсибілізації вірусним антигеном еритроцитів, оброблених таніном за Бойдену. Такі «танизированные» еритроцити адсорбують білкові антигени, нативні еритроцити - переважно полісахаридні антигени. Непряма гемагглютинация здійснюється за рахунок зміни властивостей (сенсибілізація) поверхні еритроцитів при адсорбції вірусного антигену; додавання імунної сироватки призводить до адсорбції антитіл на сенсибілізованих еритроцитах і утворення пластівців агглютината. Сенсибілізуючою активністю володіють корпускулярні антигени (віруси герпесу простого, кліщового енцефаліту, тютюнової мозаїки) та розчинні (аденовіруси, віруси грипу, збудники пситтакоза). Не з'ясована природа сенсибілізуючої антигену багатьох вірусних агентів, з якими отримана позитивна РНГА (віруси фіксованого сказу, осповакцины, поліомієліту, курячої саркоми, гепатиту собак, мікоплазма пневмонії та ін). Процес сенсибілізації еритроцитів і техніка постановки РНГА для кожної вірусної інфекції залежать від виду еритроцитів, концентрації антигену, рН середовища, температури та ін. Для РНГА не рекомендують користуватися еритроцити, які агглютинируются даним вірусом в прямій РДА. РНГА застосовують у вірусологічній практиці для титрування антитіл. РНГА є серологічної реакцією, яка в 100-1000 разів чутливіші РГГА і реакції зв'язування комплементу (РСК). В протилежність РГГА, яка виявляє тонкі антигенні відмінності серед штамів одного і того ж типу вірусу, РНГА виявляє межтиповые відмінності подібно РСК.