Для виявлення палички инфлюенцы пеніцилін додавали в живильне середовище з агаром, на яку робили посів змиву з носоглотки хворих. Завдяки наявності пеніциліну в середовищі затримувався зростання стрептококів і стафілококів і пишно росла тільки культура палички инфлюенцы, на яку пеніцилін не діяв і зростання якої на простий середовищі перешкоджали інші мікроби.
У 1932 році англійський хімік Райстрик зробив спробу очистити препарат, але він виявився нестійким і про нього знову забули.
У 1941 році в Англії вчені Р. Флорі і Чейн в результаті тривалої роботи отримали очищений пеніцилін і вперше застосували його для лікування чотирьох хворих важким сепсисом (зараження крові). Результати лікування цих безнадійних хворих, які безсумнівно загинули б, показали величезну цінність нового ліки. Але провести широке випробування цього препарату виявилася важкою. Адже в лабораторії можна було отримати лише невелика кількість пеніциліну. Природно, виникла думка про необхідність організації виробництва цього антибіотика. Але в Англії під час війни не було коштів, і Флорі і Чейн вирушили в США, де вперше в 1942 році було організовано промислове отримання цього препарату.
На початку Великої Вітчизняної війни в Радянському Союзі не було ні цвілі, з якою працювали Флорі і Чейн, ні методу отримання очищеного препарату. Пошуки радянського пеніциліну були розпочаті в 1942 році в лабораторії біохімії мікробів Всесоюзного інституту експериментальної медицини (ВІЕМ), в якій протягом багатьох років велися роботи над антимікробними речовинами - бактериофагом, лізоцимом та іншими. З 93 штамів (рас) зеленої цвілі, виділених 3. Ст. Ермольевой і Т. І. Балезиной, один виявився найбільш активним і був названий пеніцилін-крустозином ВІЕМ.
Отриманий радянськими вченими пеніцилін робив чудеса, рятуючи приречених на смерть хворих сепсисом, безнадійних хворих з важкими травмами мозку. Пеніцилін виліковував маленьких дітей від запалення легенів і менінгіту. Він визволив від такого захворювання, як сифіліс. Вже в 1943 році його з успіхом застосували і у ветеринарії для лікування копитної хвороби оленів.
Після перших випробувань радянського пеніциліну в хірургічній клініці його застосували для лікування вогнепальних поранень на одному з фронтів Великої Вітчизняної війни. Велика бригада вчених під керівництвом академіка Н. Н. Бурденко і професора 3. Ст. Ермольевой вивчала дію вітчизняного пеніциліну при різних пораненнях.
Препарат рятував воїнів, що гинули від зараження крові, він давав ефект при лікуванні газової гангрени, попереджав розвиток гнійних процесів у ранах після хірургічної обробки, ліквідував гнійні процеси при важких пораненнях черепа, виліковував бешихове запалення і запалення легенів.
До відкриття пеніциліну, особливо в першу світову війну, для лікування гнійних ран користувалися антисептиками (карболової кислотою, лизолом). Але ці речовини мають дуже суттєвий недолік - разом з мікробами вони вбивають і клітини, тканини і викликають омертвіння поверхні ран. Пеніцилін, на відміну від антисептиків, не чинить шкідливої дії на тканини тварин і людини.
При випробуваннях пеніциліну в клініці було встановлено, що він не чинить шкідливої дії на кров і сам не втрачає своєї активності в присутності крові, сироватки і гною.
У січні 1944 року в Радянський Союз приїхали англійські вчені Флорі і Сандерс. Вони привезли свій штаму цвільового гриба і зразки препаратів очищеного пеніциліну, так як не знали, що наша медицина вже має пеніцилін-крустозин ВІЕМ. За висновком Флорі, який вивчав штами цвілевого гриба і відчував пеніцилін в клініці, штам, отриманий в СРСР, не поступався англійському. Більш того, результати лікування показали, що радянський препарат може бути застосований навіть у менших дозах.
