Бактеріологічне дослідження - дослідження, призначене для виділення бактерій та вивчення їх властивостей з метою постановки мікробіологічного діагнозу.
Досліджуваний матеріал варто брати в асептичних умовах в стерильний посуд і доставляти в лабораторію можливо швидше. У разі необхідності проби слід зберігати на холоді. Методика взяття проб залежить від об'єкта, характеру захворювання і властивостей мікроорганізму. Одним із поширених прийомів бактеріологічного дослідження є бактеріоскопія.
Для вивчення нефіксованих бактерій користуються двома методами: розчавленої (між предметним та покривним склом) краплі та висячої краплі. Слід пам'ятати, що препарати нефіксованих бактерій заразні.
Для бактеріоскопії фіксованих препаратів використовують мазки. Для їх приготування краплю досліджуваної рідини розподіляють по поверхні предметного скла, а потім висушують. Найбільш поширеним методом фіксації препарату є пронесение його через полум'я газового пальника. В деяких випадках використовують фіксують склади. Фіксовані препарати, як правило, фарбують (див. Забарвлення мікроорганізмів). До числа найважливіших елементів бактеріологічного дослідження належать посіви і пересевы бактеріальних культур, вироблені бактеріальної петлею або пастерівської піпеткою. Петлю стерилізують прожарювання в полум'ї, потім її охолоджують дотиком до ділянки незасеянного агару або обполіскуючи в стерильної рідини. При використанні пастерівської піпетки її кінчик обламують пінцетом, кілька разів проносять піпетку через полум'я пальника і дають охолонути. При посівах використовують рідкі і тверді поживні середовища. При посіві на скошений агар культуру бактерій розтирають петлею по поверхні агару. При посіві в товщу агарового або желатинового стовпчика живильне середовище проколюють до дна пробірки петлею або особливої голкою. При посіві в рідку середу треба стежити, щоб рідина не виливалася і не змочувала краю пробірок і пробки. Посіви та пересевы слід проводити поблизу полум'я газового пальника, пробірки не повинні довго залишатися відкритими, петля або пастерівська піпетка з культурою не повинна ні до чого торкатися; перед тим як закривати пробірку, краї її слід пропалити. Засіяні пробірки необхідно негайно ж надписати.
Найважливішим етапом бактеріологічного дослідження є ідентифікація - визначення видової або типової належності бактерій, отриманих у вигляді чистої культури. При ідентифікації бактерій проводиться вивчення їх фізіологічних і біохімічних властивостей, токсинообразования. Широко використовують серологічні методи ідентифікації бактерій (реакції аглютинації та преципітації). У багатьох випадках ефективним виявляється біологічний метод ідентифікації мікроорганізмів, заснований на зараженні лабораторних тварин досліджуваним матеріалом або отриманої культурою бактерій і виявленні у тварин характерних патологічних змін.
Для виділення чистих культур використовують механічні та біологічні методи. Приклад механічного методу: краплю досліджуваного матеріалу розтирають одним і тим же стерильним шпателем або бактеріальної петлею по поверхні щільного живильного середовища, послідовно першої, другої і третьої чашках Петрі. Виділення чистої культури проводиться з вирослих окремих колоній і полягає у їх дослідженні та отсеве на свіже живильне середовище. Біологічні методи виділення чистих культур засновані на обліку того чи іншого властивості виділяється мікроба, що відрізняє його від інших мікробів, що знаходяться в досліджуваному матеріалі.
При біологічному методі використовують такого роду поживні середовища, в яких створені умови, сприятливі для розвитку певного виду мікробів. До числа біологічних методів відноситься також зараження лабораторних тварин, чутливих до його виділяє виду бактерій.
Вирощування бактерій виробляють в термостатах, в яких підтримується постійна температура, зазвичай 37°. У більшості випадків вирощування продовжують близько доби, але в залежності від виду бактерій бувають необхідні і інші терміни вирощування. Різні види бактерій потребують при вирощуванні в різних кількостях кисню. Для підтримки необхідної концентрації кисню в середовищі користуються різноманітними методами аерації. См. також Поживні середовища.
Бактеріологічне дослідження - комплекс методів для виявлення патогенних мікроорганізмів у хворого, у носія чи на об'єктах зовнішнього середовища. Бактеріологічні дослідження користуються також для виявлення умовно патогенних і санітарно-показових мікробів, що характеризують ступінь забруднення зовнішнього середовища, для вивчення мікробного пейзажу певного середовища (об'єкта). Бактеріологічне дослідження може бути використано для діагностики, профілактики інфекційних захворювань, для сан.-гіг. характеристики середовища, що оточує людину, для наукового дослідження.
Матеріал і метод бактеріологічного дослідження залежать від мети аналізу, умов середовища, патогенезу та перебігу захворювання. При наявності бактеріємії мікроб виявляють за допомогою посіву крові. У випадках виражених місцевих уражень збудника слід шукати у виділеннях або виділеннях ураженого органу (дифтерія, дизентерія, гонорея та ін). Нарешті, при захворюваннях зі складним перебігом, коли (як, наприклад, при черевному тифі) бактеріємія змінюється ураженнями тонких кишок, на кожному етапі застосовують відповідний метод дослідження: протягом першого тижня захворювання проводять посів крові, на другий найбільш достовірно серологічне дослідження, починаючи з третього тижня позитивний результат отримують при посіві випорожнень; останнім методом користуються і в якості контрольного дослідження для виявлення бактеріоносіїв серед реконвалесцентів і для спостереження за ними.
Виконання будь-якої з зазначених завдань здійснюють застосуванням методів, призначених для виділення і визначення мікроорганізмів. В залежності від
характеристики мікроба використовують весь комплекс методів або його частини.
Бактеріоскопія - найбільш достунный прийом, заснований на мікроскопічному вивченні матеріалу. При мікроскопії свіжих препаратів можна користуватися деякими микрохимическими реакціями (наприклад, забарвлення йодофільной бактерій розчином Люголя) або виборчої забарвленням різних структурних частин бактерій.
Більш чітко бактерії можна виявити в забарвленому препараті. Досліджуваний матеріал наносять на предметне скло тонким і по можливості рівним шаром. Дають препарату висохнути на повітрі і фіксують одним із загальноприйнятих методів, але найчастіше фламбированием, тобто двох-, триразовим швидким проведенням препарату над полум'ям пальника так, щоб скло було тепле, але не гаряче. Препарат, охолоджений після фіксації, фарбують простий або диференціальної забарвленням (див. Забарвлення мікроорганізмів). При флюоресцентної мікроскопії використовують як нативні, так і сухі препарати. В цьому випадку обробка певними барвниками викликає світіння структур мікробного тіла або всього мікроба в ультрафіолетових або коротких синіх променях. В іншій модифікації мікробів обробляють специфічними сироватками, міченими флюоресцентами (барвниками). Бактерії, відповідні сироватці, будуть світитися, так як на них осяде мічена сироватка. Гетерологичные бактерії не будуть світитися.
Методом бактеріоскопії широко користуються для бактеріологічної діагностики деяких інфекційних захворювань (гонорея, туберкульоз, поворотний тиф), а також при вивченні всього комплексу мікрофлори органу (мигдалини, піхву), продукту або іншого об'єкта.
Метод посіву, тобто виділення чистої культури шуканого мікроорганізму, є більш точним і надійним способом бактеріологічної діагностики, ніж бактеріоскопія. Свіжий матеріал розмазують по поверхні щільного живильного середовища, налитої в чашки Петрі. Первинний посів роблять на звичайні середовища, сприятливі для даного мікроба, на диференціальні або на селективні середовища. Вибір живильного середовища (див.), як і методу попередньої обробки свіжого матеріалу для посіву, залежить від ступеня його забруднення супутньої сторонньою мікрофлорою. Через 24-48 год. утримання в термостаті при оптимальній для даного мікроба температурі чашки розглядають і підозрілі колонії пересівають на середовища, які сприяють розмноженню даного збудника. Таким чином отримують культуру однорідних бактерій, які і повинні бути ідентифіковані.
Ідентифікація мікроба починається з вивчення морфології в забарвленому препараті і в розчавленої краплі (див.) для визначення форми мікробів і їх рухливості. Наступним етапом є дослідження ферментативної здатності бактерій по розщепленню вуглеводів, амінокислот, сечовини у визначених для кожного виду поєднаннях. У бактерій найбільш вивчені цукрово - і протеолітичні ферменти.
Ідентифікація мікроба повинна бути доповнена вивченням інших властивостей, характерних для кожного роду і виду мікроорганізмів. До таких властивостей відноситься здатність вибірково розчиняти еритроцити різних тварин (гемоліз), згортати плазму крові (плазмокоагуляция), розчиняти згусток фібрину (фібринолізу) та ін Всі ці особливості бактерій можуть бути використані при їх визначенні як диференційні ознаки.
Остаточне визначення мікробів деяких видів, в основному патогенних бактерій сімейства кишкових, включає серологическую ідентифікацію (див. Ідентифікація мікробів). Зазвичай для цього ставлять реакцію аглютинації, тобто виявляють скучивание бактерій під впливом однойменної імунної сироватки. Аглютинація мікробів в сироватці проти певного виду вказує на належність до цього виду. Зазвичай реакцію аглютинації ставлять орієнтовно на склі, і для остаточного визначення в пробірки з розведеннями сироватки.
Ряд мікробів не вдається визначити до кінця описаним шляхом. Тоді ідентифікацію необхідно доповнити зараженням лабораторних тварин, оскільки для деяких бактерій характерна патогенність або токсигенність, выявляющаяся при зараженні тварин. У деяких випадках зараження тварин служить також методом накопичення патогенних мікробів.
Тільки зіставлення всіх характеристик культури, зібраних при вивченні морфології, біохімічних, серологічних, а де потрібно і біологічних властивостей її, може дати підстави для ідентифікації. Відповідь при позитивному результаті дослідження не становить труднощів, якщо виділений мікроб типовий. В такому випадку вказують рід, вид і, якщо визначався, тип бактерії. При виділенні мікроба, відхиляється за якимось властивостями від типової характеристики, дається відповідь із зазначенням на відхиляється ознака. У такому випадку корисно повторити дослідження, якщо дозволяє протягом хвороби або умови збору матеріалу. Корисно також піддати культуру атипових мікробів додаткового вивчення іншими, більш складними методами.
Негативні результати бактеріологічного дослідження мають відносне значення і показують лише, що в дослідженій порції матеріалу шукані мікроби не містилися або були нежиттєздатні. Однак вони можуть бути присутніми в інший порції. З цього, наприклад, при обстеженні на бациллоносійство (черевний тиф, дизентерія, дифтерія) потрібно проводити повторні дослідження.
