Бактеріологічна техніка - сукупність методів і прийомів, що застосовуються при бактеріологічному дослідженні. Бактеріологічна техніка включає методи виявлення, культивування і виділення бактерій з досліджуваного матеріалу з подальшою їх ідентифікацією.
Основні методи бактеріологічного дослідження. Одним із поширених прийомів бактеріологічної техніки є приготування препаратів для мікроскопії (див.). На знежиреному склі рівномірно розподіляють краплю суспензії, що містить досліджуваний матеріал. Щільний матеріал наносять на предметне скло, покривають другим склом (рис. 1), потім скла розсовують в сторони, отримуючи два мазка; рідкі об'єкти (кров тощо) наносять по середній лінії скла, шліфоване скло підводять до краплі під кутом (рис. 2) і, після того як крапля розтечеться, рухають справа наліво. Мазок висушують при кімнатній температурі або в термостаті, після чого фіксують до поверхні скла в полум'я пальника; для цього скло мазком вгору проводять триразово через полум'я. При вивченні деталей структури бактерій, мазків крові, відбитків органів використовують фіксують рідини (спирт, суміш Нікіфорова, рідину Карнуа та ін).
Для фарбування служать наступні барвники: червоні - фуксин основний, фуксин кислий, сафранін, нейтральний червоний, конго червоний; сині - метиленовий синій, толуїдиновий синій, опал синій; фіолетові - генциановый фіолетовий, кристалічний фіолетовий. Прості методи фарбування бактерій - забарвлення водним розчином метиленового синього, лужним синім по Леффлеру і фуксином Пфейфера. Складні методи фарбування: за Грамом, Цилю - Нельсену, Романовському - Гімзе, Нейссеру та ін.,- застосовуються для диференціації бактерій; для вивчення структури бактеріальної клітини - Бениньетти метод (див.), Гіпсу метод (див.), Леффлера метод та ін. Після забарвлення препарат промивають водою і підсушують.
Основні елементи бактеріологічної техніки - посіви і пересевы бактеріальних культур. Пробірки з культурою і незасіяними середовищем беруть у ліву руку; у праву руку беруть бактеріальну петлю і прожарюють у полум'ї пальника. Потім пробки пробірок виймають, захоплюючи їх мізинцем правої руки. Обпалюють краю відкритих пробірок, вводять простерилизованную петлю в пробірку з культурою, остуджують петлю об стінки пробірки і нею торкаються до поверхні бактеріального росту, легким рухом набирають культуру, швидко переносять петлю в незасіяній пробірку і виробляють посів (рис. 3). Над полум'ям пробірки закривають пробками і стерилізують петлю прожарюванням. При посіві в рідкі поживні середовища користуються пастерівської піпеткою. Іноді проводять посів уколом в товщу середовища, проколюючи бактеріальної петлею або спеціальною голкою живильне середовище до дна (рис. 4).
Виділення чистих культур. Для дослідження і практичних цілей необхідно працювати з чистою бактеріальною культурою (див.). Існують методи виділення чистих культур біологічні і засновані на механічному принципі поділу мікробів. Метод розсіву по поверхні щільного середовища: краплю досліджуваного розчину наносять на тверде живильне середовище в чашках Петрі, кришки яких злегка відкривають (рис. 5); потім краплю втирають шпателем залишився на ньому матеріал послідовно переносять у другу і третю чашки. Засіяні чашки ставлять в термостат.
При необхідності підрахунку кількості бактерій у випробуваному матеріалі застосовують методи розсіву в глибині шару. Роблять три послідовні розведення матеріалу в пробірках з певним обсягом розплавленого і охолодженого агару, який потім виливають у чашку Петрі (рис. 6). При великій концентрації бактерій у вихідному матеріалі його попередньо розводять у фізіологічному розчині. На кожній наступній чашці кількість бактеріальних колоній зменшується відповідно розведення (рис. 7). Підрахунок колоній проводять в камері Вольфгюгеля.
Біологічні методи виділення чистих культур засновані на врахуванні властивостей виділяється мікроба: 1) виділення чистої культури рухливих бактерій за методом Шукевича: випробуваний матеріал засівають петлею в конденсаційну воду косого агару, не торкаючись поверхні середовища; рухливі бактерії ростуть не тільки в конденсаційної воді, але і на поверхні агару; 2) виділення чистої культури шляхом використання різної чутливості бактерій до низьких і високих температур. Цим способом користуються для виділення чистої культури спороутворюючих бактерій. Для виділення чистих культур деяких бактерій можна скористатися організмом тварини, чутливого до даної інфекції.
Вирощування бактерій. Всі бактерії по їх відношенню до температури поділяються на три основні групи: псіхрофільние (температурний оптимум зростання 5-20°), мезофільні (більшість патогенних бактерій; оптимальна температура 34-37°) і термофільні (температурний оптимум зростання 65-70°). Тривалість вирощування залежить від виду бактерій і варіює від 24 годину. до 2-3 тижнів. Для створення необхідних температурних умов застосовують термостати. Глибинне вирощування бактерій - див. Аерація в мікробіології; культивування анаеробів - див. Анаероби.
См. також Бактеріологічне дослідження.
Рис. 1. Приготування мазка мокротиння.
Рис. 2. Приготування мазка крові.
Рис. 3. Техніка посіву бактерій на скошений агар.
Рис. 4. Техніка посіву уколом.
Рис. 5. Посів на чашку Петрі.
Рис. 6. Розлив агару з культурою при вирощуванні в глибині середовища.
Рис. 7. Ріст бактерій на чашках Петрі при послідовному посіві.
