Ерліха діазореакція

Пол Ерліх
Пол Ерліх, 1915 рік

Ерліха діазореакція - це якісна проба виявлення біологічно важливих речовин у крові та сечі. Заснована на неспецифічної кольорової реакції між диазореактивом Ерліха і деякими органічними речовинами (пірол, крезол, індікан, білки, що містять амінокислоти тирозин, триптофан, гістидин та ін).
Діазореакція в сечі. Реактиви: 1) диазореактив (0,5 г сульфаниловой кислоти і 5 мл 25% розчину соляної кислоти в 100 мл води); 2) 0,5% розчин азотистокислого натрію.
Методика виконання цієї реакції: до 4 мл I реактиву додають 1-2 краплі II реактиву, приливають 4 мл сечі, потім 1 мл 10% розчину аміаку; пробірку закривають пробкою і збовтують рідину до появи піни. Проба вважається позитивною при рожевою або червоною забарвленням і негативною - жовтою або помаранчевою. Позитивна реакція спостерігається при багатьох гарячкових захворюваннях: черевному і висипному тифі, милиарном туберкульозі, лімфогранулематозі, кору, трихінельоз та ін При наявності білірубіну в сечі з'являється з диазореактивом червоне забарвлення сечі ще до додавання аміаку.
Діазореакція в крові. Застосовується при визначенні білірубіну, з яким суміш диазореактивов в певних співвідношеннях дає червоне забарвлення. Діазореакція Ерліха лежить в основі більшості методів кількісного і якісного визначення білірубіну (див.).

Ерліха діазореакція (P. Ehrlich) - кольорова реакція між диазореактивом Ерліха і поруч органічних речовин (пірол, крезол, індікан та ін), що вступають у з'єднання з азогруппой (-N=N-), що використовується для кількісного визначення біологічно важливих речовин у крові та сечі.
Приготування диазореактива: розчин 5 р сульфаниловой кислоти в 50 мл міцної соляної кислоти (d=1,12) додають воду до об'єму 1 л; до отриманого розчину додають 0,5% розчин азотистокислого натрію. При цьому утворюється диазофенилсульфоновая кислота (реактив Ерліха), яка утворює забарвлені азосоединения з деякими біологічно важливими речовинами, що знаходяться у крові та сечі.
Широке застосування діазореакція Ерліха отримала в клініці при якісному і кількісному визначенні білірубіну в крові (див. нижче). Диазореактив використовують також для визначення тирозину, гістидину і гістаміну. Білки, молекули яких входять амінокислоти тирозин, триптофан і гістидин, дають з диазореактивом оранжево-червоне фарбування. При визначенні деяких речовин в якості компонента для отримання пофарбованого азосоединения вживається не сульфанілова кислота, а інші циклічні сполуки, наприклад при визначенні фенолів у крові і в сечі - паранитроанилин, при визначенні сульфаніламідів - 2R-кислота і т. д.
Діазореакція в крові. Білірубін при диазореакции дає характерний червоно-фіолетове фарбування. Це явище було використано для більшості методів якісного та кількісного визначення білірубіну крові. В даний час найчастіше застосовують метод Ендрашика, що дозволяє визначати роздільно фракції білірубіну.
Реактиви: а) кофеїновий реактив: 5 г кофеїну, 7,5 г бензойнокислого натрію і 12,5 г оцтовокислого натрію розчиняють при невеликому підігріванні в дистильованій воді і доливають водою до 0,1 л; б)диазореактив: перший реактив - 1 г сульфаниловой кислоти розчиняють у невеликій кількості води, додавши 15 мл концентрованої HCl, доливають водою до 1 л; другий реактив - 0,5% розчин азотистокислого натрію.
Перед вживанням змішують 10 мл першого реактиву і 0,25 мл другого. Для визначення загального білірубіну до 1 мл сироватки доливають 3,5 мл кофеїнового реактиву і 0,5 мл диазореактива, а при визначенні прямого білірубіну до 1 мл сироватки додають 3,5 мл фізіологічного розчину і 0,5 мл диазореактива. Добре перемішавши, обидві проби через 5 хв. колориметрируют проти компенсаційного розчину, що складається з 1 мл сироватки, 3,5 мл кофеїнового реактиву і 0,5 мл фізіологічного розчину при зеленому світлофільтрі. Непрямий білірубін визначається відніманням із загального прямого.
Діазореакція в сечі полягає в додаванні до 10 мл свіжої сечі 10 мл диазореактива і 2 мл 10% розчину аміаку. При цьому після енергійного збовтування з'являється рожеве або карміново-червоне фарбування. Реакція вважається позитивною, якщо пофарбовані не тільки рідину, але і утворилася піна. Жовтий або оранжевий колір свідчить про негативний результат. У сумнівних випадках освіта на наступний день осаду синьо-зеленого або чорного кольору дозволяє вважати реакцію позитивною. В даний час ця реакція не має практичного значення, так як вона неспецифічна і характерна для багатьох гарячкових захворювань: черевного та висипного тифов, міліарного туберкульозу, полісерозіта, кору, лімфогранулематозу, пневмонії, дифтерії, бешихового запалення, трихінельозу. Крім того, лікарські препарати: опій, морфін, діонін, атофан, гексаметилентетрамін, ревінь, героїн, хризаробин, сальварсан - дають схоже фарбування, а препарати таніну, фенол і його похідні, крезол, гваякол і салол заважають реакції.