Гельминтологические методи дослідження

Гельминтологические методи дослідження спрямовані на виявлення яєць (личинок) або фрагментів гельмінтів (рис.). Оскільки основна маса гельмінтів людини паразитує в шлунково-кишковому тракті або сполучених з ним органах, найчастіше досліджують фекалії хворого. Фекалії повинні доставлятися в лабораторію свіжими, в чистому посуді. При необхідності їх консервують додаванням рідини, що містить 1900 мл 0,2% водного розчину азотнокислого натрію, 250 мл міцного розчину Люголя, 300 мл формаліну і 75 мл гліцерину.
Для виявлення фрагментів гельмінтів фекалії переглядають неозброєним оком, потім змішують з водою і досліджують невеликими порціями в чашці Петрі на темному тлі. Всі підозрілі частинки поміщають на предметне скло в краплю води і досліджують під лупою. Можна добову порцію калу помістити в циліндр з додаванням 5-10-кратного кількості води. Після розмішування посудину залишають до повного осадження зважених часток. Поверхневий шар рідини зливають і наливають чисту воду. Відмитий осад переглядають невеликими порціями в чашках Петрі неозброєним оком або під лупою. Для виявлення яєць застосовують мікроскопічні методи дослідження.
Метод нативного мазка. Невелика кількість калу з різних місць досліджуваної порції розтирають на предметному склі в краплі 50% розчину гліцерину, ізотонічного розчину хлориду натрію або води. Суміш накривають покривним склом і розглядають під мікроскопом.
Метод спливання по Фюллеборну. Одну частину випорожнень розмішують в 20 частинах насиченого розчину хлориду натрію (питома вага 1,18), який додається невеликими порціями. Спливли на поверхню великі частинки негайно видаляють, а суміш залишають на 45 хв. протягом цього часу яйця гельмінтів, мають меншу питому вагу, ніж розчин хлориду натрію, спливають на поверхню. Поверхневу плівку знімають дротяною петлею діаметром близько 1 см і переносять на предметне скло для дослідження під мікроскопом.
Метод Калантарян. Ефективність методу спливання підвищується при заміні хлориду натрію насиченим розчином азотнокислого натрію. У цьому випадку суміш витримують 10-15 хв.
Поверхневу плівку, що утворюється після відстоювання суміші калу з розчином хлориду натрію або азотнокислого натрію, можна знімати і предметним склом. З цією метою баночку, налиту вщерть сумішшю випорожнень з розчином солі, накривають предметним склом так, щоб нижня його поверхню стикалася з рідиною. Після відстоювання скло знімають і, швидко повернувши догори поверхнею, на якій знаходиться плівка, переглядають під мікроскопом.
Зішкріб сперианальных складок (для виявлення яєць гостриків і онкосфер бичачого ціп'яка) роблять вранці до здійснення туалету. Дерев'яним шпателем, змоченим у воді або в 50% розчині гліцерину, виробляють зіскоблювання навколо анального отвору. Отриманий матеріал переносять на предметне скло в краплю води або 50% розчину гліцерину і переглядають під мікроскопом. Шпатель можна замінити вологим ватним тампоном, яким протирають перианальную область, потім добре прополіскують у воді. Воду центрифугують і осад досліджують під мікроскопом.
Метод Берманна (для виявлення личинок). Металеву сітку з нанесеними на неї 5-6 г фекалій зміцнюють на скляній воронці, вставленої в штатив. На нижній кінець лійки надягають гумову трубку з затискачем. Лійку наповняють водою, підігрітою до t° 50°, так, щоб нижня частина сітки з калом стикалася з водою. Личинки активно переходять у воду і накопичуються в нижній частині гумової трубки. Через 4 години рідина спускають в центрифужні пробірки, центрифугують і осад переглядають під мікроскопом.
Метод культивування личинок анкилостомидна фільтрувальному папері. Свіжі фекалії (0,5 г) намазують на смужку фільтрувального паперу розміром 15x150 мм так, щоб краї смужки залишалися вільними. Смужку поміщають в пробірку діаметром 18 мм, що містить 3 мл води. Пробірку закривають пробкою і витримують при t° 25° протягом 5-7 днів. За цей час розвинулися з яєць личинки спускаються по папері на дно пробірки. Їх вбивають нагріванням і осад досліджують під мікроскопом для диференціального діагнозу. Якщо точне визначення виду паразита не потрібно, пробірки переглядають неозброєним оком.
Аналіз мокротиння, носової слизу і піхвових виділень для виявлення яєць легеневої трематоди парагонимуса, личинок аскарид і анкилостомид, яєць гостриків, фрагментів эхинококкового міхура. Досліджувану порцію слизу (виділень) намазують на скло і переглядають на чорному і білому фоні макроскопічно, а потім під мікроскопом. Можна додати до досліджуваного матеріалу 25% розчин антиформина, ретельно збовтати і витримати 1-1,5 години в термостаті для розчинення слизу. Суміш центрифугують і осад досліджують під мікроскопом.
Аналіз дуоденального та шлункового соку для виявлення яєць печінкових трематод, анкилостомид, личинок Strongyloides. Всі три порції дуоденального вмісту, отримані при зондуванні, центрифугують і осад досліджують під мікроскопом. Так само досліджують і шлунковий сік.
Дослідження тканин. Для виявлення личинок трихинелла шматочки биопсированной м'язи ретельно розщеплюють на волоконця, здавлюють між компресорними склом (товсті скла з гвинтами) і досліджують під мікроскопом із затіненим світлом. Для виявлення цистицерків м'язи розшаровують препаровальными голками, виділений пухирець очищають від навколишньої тканини, здавлюють між двома предметними скельцями і досліджують під лупою.
Аналіз крові (для виявлення личинок филярий). Досліджують висячу краплю на покривному склі, окантованном вазеліном. Можна 0,3 мл крові змішати з 10-кратним кількістю 3% розчину оцтової кислоти. Суміш центрифугують і осад досліджують під мікроскопом. Для збагачення препаратів до 1 мл венозної крові додають 3 мл 2% розчину формаліну або 5-кратну кількість рідини, що складається з 95 мл 5% розчину формаліну, 5 мл оцтової кислоти і 2 мл концентрованого спиртового розчину гематоксиліну. Суміш центрифугують, осад промивають дистильованою водою шляхом центрифугування і досліджують під мікроскопом. Для диференціювання різних видів филярий досліджують мазки, пофарбовані за методом Гимзы - Романовського.
Методи імунологічної діагностики. Застосовують серологічні реакції (аглютинації, преципітації, зв'язування комплементу) і алергічні діагностичні проби (див.) з антигенами з відповідного виду гельмінта.
Гельминтологические методи дослідження. Рис. Яйця гельмінтів. 1-10 - яйця круглих черв'яків (нематод): 1 - 3 - аскариди (1 - запліднене яйце, 2 - запліднене яйце без білкової оболонки, 3 - незапліднене яйце); 4 - аскариди котячої; 5-аскариди м'ясоїдних; 5-гострики; 7 - волосоголовця; 8 - томинкса; 9 - анкилостомид; 10 - трихо-стронгилид. 11 - 15 - яйця стрічкових черв'яків (цестод): 11 - ціп'яка бичачого; 12 - карликового ціп'яка; 13 - ціп'яка щурячого; 14 - ціп'яка тиквоподібного; 15-лентеца широкого. 16 - 24 - яйця сисун (трематод): 16 - трематоди (шистосоми) японської; 17 - трематоди (шистосоми) сечо - статевої; 18 - трематоди (шистосоми) Мансона; 19 - трематоди (парогонимус) легеневої; 20 - трематоди (описторхис) сибірської (котячої); 21 - трематоди (клонорхис) китайській; 22 - трематоди (метагонімуса) кишкової; 23 - трематоди (фасціоли) печінкової; 24 - трематоди (дикроцелиум) ланцетоподібної.