Прямий базофильный тест з Shelly (1962)

Реакція ставиться з неінфекційними алергенами. Побутові, епідермальні, пилкові використовуються в концентрації 1000 PNH в мл, харчові у розведенні з фізіологічним розчином 1 :10 від вихідної стандартної концентрації, антибіотики - в концентрації 1000 ОД/мл, ампулированные вітамінні препарати у розведенні з фізіологічним розчином 1:10, новокаїн-0.3% розчин, амідопірин - 0,2% розчин, анальгін і сульфаніламіди - 1% розчин, еуфілін - 0,24% розчин, сірчанокисла магнезія - 2,5% розчин. У тесті використовуються лейкоконцентрат, який отримують шляхом центрифугування при 2000 об/хв протягом 5 хвилин крові, взятої з вени хворого в стерильну пробірку, змочену гепарином (3 краплі гепарину на 5 мл крові). Лейкоцитарний шар сірувато-білого кольору, що утворюється на кордоні між плазмою та еритроцитами, набирається пастерівської піпеткою.
Обладнання і реактиви: термостат, центрифуга на 3000 об/хв, мікроскоп бінокулярний, гепарин, 0,3% розчин фарби «нейтральний червоний», вазелін хімічно чистий, стерильні пастерівські піпетки, пробірки, предметні і покривні скла.
Приготування і забарвлення предметних стекол. Для приготування 0,3% спиртового розчину фарби «нейтральний червоний» 300 г барвника змішується з 100 мл абсолютного спирту. Для кращого розчинення суміш поміщається в термостат при 37°С на добу, періодично помішується, потім фільтрується через фільтрувальний папір. Для знежирення предметні скла містяться в суміші Нікіфорова (спирт і ефір 1:1). Забарвлення скла проводиться до реакції: на знежирене предметне скло наносять краплю барвника, висушують при кімнатній температурі. Пофарбовані скла можуть зберігатися протягом кількох місяців.
Техніка реакції. На попередньо знежирене і забарвлене 0,3% спиртовим розчином «нейтрального червоного» предметне скло наносять 0,05 мл лейкоцитарної суспензії хворого і 0,05 мл алергену, перемішують і покривають покривним склом, краї якого змазані вазеліном; залишки суспензії промокають. Паралельно готується 2 контрольних мазка: 1-й з алергеном, до якого у хворого немає підвищеної чутливості, 2-й-з тест-контрольною рідиною, на якій готується алерген. Досвідчений препарат і контрольні поміщають у термостат при 37° С на 15 хвилин; потім під імерсійної системою мікроскопа (при збільшенні 600) підраховується 40 базофілів у кожному препараті і відзначають серед них кількість морфологічно змінених і дегранулированных клітин.
Оцінка реакції. Тест вважається позитивним, якщо відсоток змінених базофілів у досвіді перевищує такий в контролі більш ніж на 10%. При цьому реакція вважається слабоположительной, якщо відсоток дегранулированных клітин становить 11 - 15%, помірно позитивною (+ +) - якщо він перевищує контрольний на 16-20% і різко позитивною (+ + +) - при дегрануляції базофілів у досвіді вище контрольного більш ніж на 20%. Число дегранулированных клітин в контролі не повинно бути більше 1-2 (3-5%).