Люмінесцентна мікроскопія - оптичне дослідження мікрооб'єктів, пофарбованих спеціальними барвниками (флюорохромами), що випускають свічення при дії ультрафіолетовими променями. Для люмінесцентної мікроскопії застосовуються спеціальні мікроскопи оптичні пристрої, основною частиною яких є джерело ультрафіолетових променів і система фільтрів до нього.
Флюорохроми, як правило, флуоресціюють по-різному в залежності від хімічного складу структур, з якими вони взаємодіють. Деякі з них володіють спорідненістю до певних клітинним структурам. Наприклад, акридиновый помаранчевий барвник забарвлює нуклеопротеиды клітини, аурамін - воскоподібна речовина, що міститься в мікобактеріях. Деякі мікрооб'єкти не вимагають попередньої забарвлення флюорохромами і вивчаються з допомогою люмінесцентної мікроскопії без фарбування. См. також Люмінесцентний аналіз, Люмінесценція.
Люмінесцентна мікроскопія (флюоресцентна мікроскопія) - спеціальний вид мікроскопування, заснований на використанні власної (первинної) або наведеної (вторинної) фотолюмінесценції мікроскопічних об'єктів. Видима люмінесценція (див.) препарату порушується або синьо-фіолетовим світлом або ультрафіолетовими променями.
Люмінесцентний мікроскоп в принципі - звичайний біологічний мікроскоп, оснащений двома світлофільтрами: один пропускає тільки збуджують синьо - або ультрафіолетові промені (його розміщують перед джерелом світла), інший поглинає ці промені і пропускає тільки більш довгохвильова світло люмінесценції препарату (його встановлюють у тубусі або на окулярі мікроскопа). Джерелами світла служать ртутно-кварцові лампи надвисокого тиску (типу ДРП1) або лампи розжарювання точкового типу. Яскраве кольорове світіння об'єктів на темному тлі забезпечує високий контраст. Оптико-механічна промисловість випускає спеціальні люмінесцентні мікроскопи і окремі освітлювачі.
Лише деякі біологічно значущі речовини мають виражену власну люмінесценцію у видимій області спектра. До них відносяться деякі пігменти (хлорофіл, порфірини, ліпохроми), вітаміни А і В2, алкалоїди (берберин, хінін та ін), антибіотики (тетрациклін та ін), хіміотерапевтичні і токсичні речовини. Проникнення цих речовин в органи і клітини, їх розподіл і перетворення можуть бути простежені за допомогою прижиттєвої люмінесцентної мікроскопії. Частіше в люмінесцентної мікроскопії використовують люмінесцентну «забарвлення» спеціальними речовинами (флюорохромами), вибірково додають тонким структур клітини і тканин здатність люмінесціювати (люмінесцентна цитохимия). Так, наприклад, флюорохром акридиновый помаранчевий застосовують для контрастування ядерних структур, виявлення нуклеїнових кислот, мукополісахаридів, для виявлення мікробів і великих вірусів, для цитодіагностіки, в тому числі розпізнавання в мазках ракових клітин; аурамін 00 служить для виявлення кислотостійких бактерій (туберкульозу, прокази), рикетсій і деяких вірусів; примулин - для флюорохромирования елементарних тілець вірусів і розрізнення живих і мертвих клітин; фосфін ЗК, нільський блакитний і бензпірен - для локалізації ліпідів у клітинах.
Особливе значення в люмінесцентної мікроскопії надається люмінесцентно-імунологічним методам [Куне (A. Coons) з співр., 1942, 1950], заснованим на застосуванні люмінесцентно мічених специфічних сироваток (антитіл). Мітчиком частіше служить флюорохром изотиоцианат флюоресцеїну. Одержуваний комплекс «антитіло-флюорохром» дозволяє швидко виявляти, ідентифікувати та локалізувати навіть незначні кількості відповідних антигенів, у тому числі вірусів, рикетсій, бактерій на тлі сторонньої мікрофлори, а також виявляти специфічні білки, ферменти, полісахариди в клітинах і тканинах. Поряд з візуальними спостереженнями і фотографуванням в Л.м. все ширше застосовується об'єктивна реєстрація інтенсивності спектрів і виходу люмінесценції.
В СРСР розвивається новий вид Л. м. - так звана ультрафіолетова Л.м., за допомогою якої досліджується власна ультрафіолетова невидима в звичайних умовах люмінесценція об'єктів (Е. М. Брумберг), тонко відбиває особливості їх фізіологічного стану.
Люмінесцентна мікроскопія клітин і тканин. При люмінесцентній мікроскопії можна вивчати первинну (тканини й органи людини й тварин мають нечітку белесую, блакитну чи-синю люмінесценцію) і вторинну люмінесценцію клітин і тканин. Вивчення вторинної люмінесценції живих і фіксованих клітин і тканин (після їх забарвлення флюорохромами) отримало широке поширення. При вивченні живих клітин флюоресцирующие речовини застосовують у дуже малих кількостях, не викликає токсичної дії. В цитологічних дослідженнях Л. м. застосовують при діагностиці злоякісних новоутворень в зіскрібків, пунктату, мокротинні, промивних водах. Цей метод дозволяє швидко отримати яскраво забарвлений препарат, в якому атипові клітини виділяються яскравим світінням, відтінками кольору і структурою. Л. м. застосовується і в гистохимии. Використання акридинового оранжевого дозволяє виявити нуклеїнові кислоти, при цьому ДНК дає зелену, а РНК - червону флюоресценцію. Той же флюорохром в нефіксованих зрізах допомагає виявити мукополісахариди, а при модифікації цього методу - муцини. Фосфін 3R, родамін, бензпірен та ін. виявляють у зрізах ліпіди.
См. також Мікроскопія.
