Мікроскопічна техніка - комплекс прийомів і правил поводження та роботи з мікроскопом і його допоміжними частинами.
При роботі з мікроскопом перш за все необхідно оберігати його від забруднень (в проміжках між роботою його накривають скляним або картонним ковпаком). Не рекомендується часто вигвинчувати об'єктиви: спрацьовує різьблення і порушується їх центрування. Оптичну частину ретельно протирають багато разів пере незабрудненій батистових або полотняною ганчірочкою, сліди бруду видаляють тампоном, змоченим 95% спиртом, а потім протирають сухим тампоном. Масло знімають з поверхні лінзи сухою м'якою ганчіркою, а його залишки можна видаляти ксилолом. З механічної частини приладу видаляють пил. Складна чищення та змащування здійснюється спеціалістом.
Робота з сучасними мікроскопами вимагає застосування раціонального освітлення, ретельного вибору оптичної системи «об'єктив - окуляр - конденсор», а також предметних і покривних скелець необхідної якості, відповідної підготовки препарату - об'єкта дослідження. Як точкових джерел світла служать освітлювачі ОІ-7, ОІ-9, ОІ-18, ОІ-19, забезпечені колекторної лінзою. Освітлювач встановлюють на відстані 30-40 см перед мікроскопом. Не слід занадто яскраво висвітлювати полі зору, так як це знижує якість зображення. Встановивши освітлення, регулюють кутову апертуру конденсора, відкривши повністю апертурную діафрагму і закривши повністю діафрагму поля (колектора), спостерігають в мікроскоп світиться гурток (отвір діафрагми). Потім поступово звужують апертурную діафрагму до моменту, коли в поле зору буде видно пляма без блакитний або зеленої облямівки. Якість зображення залежить від раціонального застосування об'єктивів і окулярів. Користуючись різними поєднаннями об'єктивів і окулярів, можна отримати різні збільшення. Однак вибір потрібного збільшення повинен визначатися передусім об'єктом, цілями дослідження і роздільною здатністю мікроскопа.
При бактеріоскопії, як правило, застосовуються иммерсионные об'єктиви (масляний, водний, гліцериновий). Для отримання хорошого зображення без застосування покривного скла рекомендується вживати спеціальне иммерсионное масло, краплю якого наносять на мазок, розташований на предметному склі. При роботі з иммерсионным об'єктивом потрібно дуже обережно опускати тубус, щоб не пошкодити фронтальну лінзу об'єктива. Якість зображення залежить і від товщини предметного скла (не більше 1,1-1,4 мм) і покривного скельця (не товщі 0,15-0,17 мм).
Допоміжними приладами при мікроскопії служать: нагрівальний столик, окуляр-мікрометр, об'єкт-мікрометр, рисовальный апарат і микроманипулятор.
Нагрівальний столик встановлюється замість предметного столу. Ступінь нагріву регулюється терморегулятором. Препарат на такому столику встановлюється, як і на звичайному предметному столику мікроскопа.
Окуляр-мікрометр дає можливість вимірювання спостережуваних об'єктів. З цією метою фокусують об'єктив на шкалі об'єкт-мікрометра, кожна поділка якої дорівнює 10 мк.
Важливим розділом мікроскопічної техніки є замальовка об'єкта дослідження. Малюнок можна зробити візуально або більш точно за допомогою рисовального апарату. При візуальному методі в мікроскоп дивляться лівим оком, а правим стежать за рухом олівця на папері. Рисовальный апарат насаджується на тубус мікроскопа. Дзеркало відкидає через призму зображення паперу і олівця, малює в площині очної точки окуляра, очей, тому спостерігач одночасно бачить об'єкт, папір і кінчик олівця.
Микроманипулятор дозволяє здійснювати тонкі і точні рухи мікроінструментів і виконувати в полі мікроскопа деякі операції на клітці (видалення і трансплантація ядер, ін'єкції різних речовин, відрізання різних ділянок цитоплазми тощо). Він складається з системи штативів, забезпечених гвинтами, зажимающими микроинструменты, що забезпечує рух мікроінструментів у всіх напрямках.
Живі об'єкти (бактерії) поміщають на предметне скло в краплю найбільш підходящої для них середовища (можна ізотонічний розчин хлориду натрію) і, накривши покривним склом (розчавлена крапля), розглядають у світлі, що проходить, у світлому або темному полі. Фіксовані і пофарбовані препарати бактерій виготовляють у вигляді мазків або відбитків (див. Забарвлення мікроорганізмів).
Микроскопирование препаратів - див. Мікроскопія. См. також Мікроскоп.
Мікроскопічна техніка - правила обігу та роботи з мікроскопом і його допоміжними приладами.
Важлива умова успіху мікроскопування - установка освітлення. Тільки при оптимальному освітленні по Келеру (рис. 1) можна реалізувати всі можливості мікроскопа. Щоб встановити освітлення по Келеру, необхідно мати стандартний освітлювач типу ОІ-7 (рис. 2) або ОІ-19 с микролампой (з невеликою, щільно скрученої спіраллю), яку можна пересувати уздовж осі освітлювача. При цьому світло микролампы фокусується лінзою-колектором, і на деякій відстані від освітлювача виникає різке зображення спіралі лампи. Площа лінзи обмежується ірис-діафрагмою змінної величини. Різке зображення спіралі лампи направляють через дзеркало мікроскопа на закриту до відмови діафрагму конденсора, що представляє світлосильну короткофокусную систему лінз, яка збирає весь входить в неї світловий потік на дуже малий ділянку об'єкта. Весь освітлювач переміщують по столу до тих пір, поки зображення спіралі лампи не покриє всю діафрагму конденсора. Цей момент помічають, дивлячись спереду на плоске дзеркало мікроскопа, у якому відображається діафрагму конденсора. Якщо потрібно, лампу в освітлювачі пересувають уздовж осі, поки зображення спіралі не досягне потрібної величини, після чого повністю відкривають діафрагму конденсора.
Рис. 1. Схематичне зображення ходу променів при освітленні препарату за методом Келера: 1 - нитка лампи; 2 - колектор; 3 - діафрагма поля; 4 - зображення нитки лампи в площині апертурної діафрагми; 5 - апертурна діафрагма; в - конденсор; 7 - зображення країв діафрагми поля в площині препарату.
Рис. 2. Мікроскоп МВВ-1 з освітлювачем ОІ-7.
Потім на предметний столик мікроскопа ставлять препарат і фокусують на ньому той об'єктив, з яким збираються працювати.
Дивлячись в окуляр, рухом плоского дзеркала досягають найкращого в цих умовах освітлення. Потім закривають до упору діафрагму освітлювача. Якщо при цьому її зображення йде з поля зору, його потрібно повернути рухом дзеркала. Піднімаючи або опускаючи конденсор, намагаються зробити зображення діафрагми освітлювача різким. Цим визначається оптимальна висота конденсора при його взаємодії з даними об'єктивом (при роботі з об'єктивами малих збільшень доводиться відгвинчувати верхню лінзу конденсора, щоб узгодити його роботу з можливостями об'єктива). При зміні зображення об'єктива закритою діафрагми освітлювача слід знову сфокусувати у фокальній площині об'єктива.
Рухом дзеркала зображення діафрагми освітлювача переводять в центр поля зору. Якщо краї зображення пофарбовані неоднаково (один полюс синюватий, інший - червонуватий), це означає, що вісь освітлювача нахилена до вертикальної площини мікроскопа. Спостерігаючи через окуляр, переміщують освітлювач вручну так, щоб фарбування країв зображення стала однаковою по всій його окружності. Освітленість поля зору стає рівномірним по всій площі. Залишається розкрити діафрагму освітлювача настільки, щоб її зображення точно вписалася в полі зору даного об'єктива. Світловий потік буде використовуватись повністю і не виникне надмірних світлових пучків, які можуть спричинити перешкоди в зображенні. Тепер за допомогою реостата, змінює живлення освітлювача, встановлюють такий розжарення лампи, при якому око не стомлюється надмірною яскравістю і без праці розрізняє найдрібніші деталі.
Установка освітлення по Келеру - обов'язкова умова кваліфікованої роботи з мікроскопом. Порушення правильного освітлення неминуче веде до втрати дозволу та контрасту, до оптичних помилок, особливо при мікрофотографії і микрокиносъемке.
До сучасних мікроскопів додаються різні пристосування для автоматичного і напівавтоматичного установки освітлення. Їх використання полегшує установку освітлення, але не скасовує методу Келера. На базі стандартного освітлення по Келеру, зробивши деякі додаткові операції, налагоджують роботу всіх інших видів мікроскопів. Так, наприклад, для переходу до темнопольної мікроскопії потрібно після установки стандартного освітлення замінити звичайний конденсор темнопольним (не змінюючи положення інших вузлів мікроскопа) і, спостерігаючи в окуляр, повільно піднімати його до тих пір, поки не виникне темнопольное зображення - блискучі частинки об'єкта на майже чорному тлі. Предметне скло для темнопольної мікроскопії повинно мати товщину 1 -1,2 мм, інакше конденсором не можна сфокусувати світло на об'єкті.
Перехід до фазово-контрастної мікроскопії дещо складніше. Конденсор фазово-контрастного пристрою має в фокальній площині барабан з набором кільцевих діафрагм різного розміру (див. рис. 2 ст. «Мікроскопія»), Цифри, що з'являються у вікні барабана при його повороті, показують, яким об'єктивом (х10, х20, х40 або х90) слід користуватися при діафрагмі, величина якої видно у вікні в даний момент; цифра означає Про відсутність діафрагми (робота конденсора у звичайному режимі). У цьому положенні встановлюють стандартне освітлення. Потім фокусують на препараті намічений до роботи об'єктив.
Зображення, як правило, видно дуже погано, але потрібно домогтися його фокусування. Поворотом барабана встановлюють потрібну кільцеву діафрагму. Замість окуляра вставляють допоміжний мікроскоп, наявний в комплекті фазово-контрастного пристрою. Він полегшує розгляд зони, де формується зображення.
Переміщаючи окуляр цього мікроскопа, домагаються різкого видимості двох кілець різної щільності, розташованих в глибині тубуса мікроскопа. Одне з них утворено кільцевою щілиною в діафрагму конденсора; інше являє собою так звану фазову пластинку - напівпрозоре кільце з спеціального покриття, нанесене на одну з лінз об'єктива. Зображення цих кілець, як правило, не збігаються один з одним. Рухом центруючих гвинтів, розташованих під барабаном, переміщують діафрагму так, щоб її зображення повністю співпало з фазовою платівкою. Після цього замінюють допоміжний мікроскоп звичайним окуляром і починають спостереження фазово-контрастированного зображення.
Приблизно такими ж прийомами можна отримати амплітудно контрастування в мікроскопах амплітудно-контрастного (аноптрального) типу.
Після зміни препарату слід перевірити, чи збереглися умови освітлення, так як товщина предметних стекол коливається і площину об'єкта може не збігтися з раніше встановленою площиною фокуса конденсора. Для перевірки потрібно закрити діафрагму освітлювача. Якщо її зображення при об'єктиві, сфокусованому на новому препараті, виявиться нерізким, потрібно змінити висоту конденсора, після чого знову відкрити діафрагму до розміру поля зору.
Микроскопирование краще вести за допомогою бінокулярної насадки; вона розподіляє світлову навантаження на обидва ока, які в результаті менше стомлюються при тривалій роботі.
Незважаючи на значні успіхи мікрофотографії і микрокиносъемки за останні роки, малювальні апарати залишаються дуже корисними при роботі з товстими, багатоплановими об'єктами, які неможливо сфотографувати з-за великої глибини. Промисловість випускає рисовальный апарат РА-4, користування яким не викликає труднощів. Апаратура для микрофотосъемки (мікро-фотонасадка МФН і ін) проста, доступна і зручна в зверненні. Однак отримання високоякісних мікрофотографій вимагає великої практики.
Закінчивши роботу з мікроскопом, потрібно прикрити його від пилу. Якщо використовували іммерсійне об'єктив, кедрове масло потрібно обережно стерти чистої долонею і відмити його сліди з фронтальної лінзи об'єктива чистою ганчіркою, злегка змоченою бензином або ксилолом (рясно змочувати не можна, так як ці речовини можуть розчинити клей, що скріплює лінзи об'єктива).
Правила догляду за мікроскопом описані в інструкції до нього.
Бактеріоскопія - дослідження бактерій за допомогою світлового мікроскопа - широко застосовується в медичній практиці. Бактериоскопическому дослідження (див. Бактеріологічне дослідження) піддають фіксовані пофарбовані препарати, а також бактерії в живому стані в препаратах «висяча» або «розчавлена» краплі (див. Висяча крапля, Розчавлена крапля).
Виготовлення мікроскопічних препаратів - див. Бактеріологічна техніка. Бактеріологічне дослідження, Вірусологічні дослідження, Гістологічна техніка. До будь-якого микроскопическому препарату пред'являється одна загальна вимога: товщина предметного скла не повинна перевищувати 1,2-1,4 мм, покривного - 0,4 мм.
