Бактеріологічне дослідження мокротиння дозволяє виявити збудників захворювань легенів. Гнійний, кров'янистий грудочку мокротиння розтирають між двома предметними скельцями. Висохлі мазки фіксують на вогні, потім фарбують за Грамом (див. Грама метод забарвлення), інший по Цилю - Нельсену. Забарвлення за Грамом дозволяє виявити грампозитивні мікроби - капсульний пневмокок (рис. 17), стрептокок, стафілокок; грамнегативні - капсульна диплобацилла Фрідлендера (рис. 18), паличка Пфейффера (рис. 19) та ін Мікобактерії туберкульозу шукають в мазку, пофарбованому але Цилю - Нельсену. На мазок накладають шматочок фільтрувального паперу, рівний за площею мазком, наливають на нього фуксин Ціля (1 г основного фуксину розтирають в ступці з декількома краплями гліцерину, потім з 10 мл 96% спирту і доливають до 90 мл 5% розчину фенолу) і нагрівають на нежаркому полум'я до появи парів. Папірець скидають, мазок опускають у 5-10% розчин сірчаної кислоти (або 3% розчин соляної кислоти в спирті) до знебарвлення, добре промивають водою, дофарбовували 20-30 сек. 0,5% розчином метиленового синього і промивають водою. Червоні мікобактерії добре видно (при імерсійної системи) на блакитному тлі препарату (рис. 20). У разі незнаходження мікобактерії туберкульозу в мазку вдаються до методу їх накопичення - флотації. 10-15 мл мокротиння поміщають в пляшку з похилими плічками місткістю 250 мл, додають подвійний об'єм 0,5% розчину їдкого натру і струшують до повного розчинення мокротиння. Додають 100 мл дистильованої води і 1 мл толуолу (ксилолу, бензину), струшують 10 - 15 хв., доливають води до горла і залишають на 1-2 години. Утворився зверху сливкообразный шар відсмоктують піпеткою з балончиком і наносять по краплях на підігріте скло, кожен раз на попередню підсохлу краплю. Препарат фіксують і фарбують по Цилю - Нельсену. При негативному результаті вдаються до посіву мокротиння (бактеріологічне дослідження) або щеплення її тварині (біологічне дослідження). Посіви мокротиння використовують також для визначення її чутливості флори до антибіотиків.
Хімічне дослідження. Реакція мокротиння на лакмус, як правило, слаболужна, кислої вона може стати при розкладанні М. і при примешивании шлункового вмісту (кисла відрижка, шлунково-бронхіальний свищ). Білок в М. відбувається запального ексудату і розпаду лейкоцитів. Його мало (сліди) в слизовій М., багато (1-2%) в М. при пневмонії, ще більше при набряку легені. Для його визначення до М. додають подвійну кількість 3% розчину оцтової кислоти, енергійно збовтують, фільтрують і у фільтраті визначають білок одним із звичайних способів (див. Сеча). Враховують триразове розведення.
Бактеріоскопічне, бактеріологічне і біологічне дослідження. Вивчення мікробної флори мокротиння необхідно для уточнення діагнозу і для правильного вибору методу лікування. Цій меті служать бактеріоскопічне, бактеріологічне і біологічне дослідження. Бактеріоскопічне дослідження досягає мети при відносно великому вмісті мікробів у М. Для приготування препаратів гнійний грудочку переносять на зовнішню третину предметного скла, накривають такою ж частиною іншого предметного скла і розтирають між ними. Мазкам дають висохнути, фіксують трьохкратним проведенням через полум'я газового пальника і фарбують по Граму (див. Грама метод забарвлення), інший по Цилю - Нельсену (див. Туберкульоз, лабораторні дослідження). Забарвлення за Грамом дозволяє виявити грамположительный капсульний пневмокок, грамотрицательную капсульну пневмобациллу Фрідлендера, паличку Пфейфера (цветн. рис. 5, 6 і 8), стафілокок, стрептокок, паличку Венсана, спириллы, катаральний микрококк та ін. При дослідженні зазначають кількість знайденого в полі зору бактерій (мало, помірно, багато) і переважання якого-небудь виду. Способом Ціля - Нельсена фарбують кислототривкі мікроби, головним чином мікобактерії туберкульозу. Мікобактерії при цій фарбуванні виходять червоного кольору і добре видно на блакитному тлі (цветн. рис. 1).
Трохи більший відсоток мікобактерій туберкульозу виявляють за допомогою люмінесцентної мікроскопії (див.). Світяться мікобактерії добре видно при дослідженні мазка з сухим об'єктивом Х40 при окулярі ХЮ. Мазки готують і фіксують, як зазвичай, потім заливають на 5-10 хв. розчином барвника (аурамін 1 : 1000, акридин помаранчевий, суміш аурамина і родаміну), промивають водою, знебарвлюють 5 хв. солянокислим спиртом, знову промивають водою і обробляють
розчином кислого фуксину (кислий фуксин 1 г, оцтова кислота 1 мл, дистильована вода 500 мл) або метиленового синього, які гасять світіння фону. Препарат розглядають в ультрафіолетовому світлі (цветн. рис. 2).
Для полегшення пошуків мікобактерій туберкульозу вдаються до методів накопичення, з яких найчастіше застосовують метод флотації. 10-15 мл мокротиння поміщають в эрленмейеровскую колбу або пляшку з похилими плічками місткістю 250 мл, додають рівний об'єм 0,5% розчину їдкого натру і струшують суміш до гомогенізації її. Додають 50 мл дистильованої води і 1 мл толуолу (ксилолу, бензину), струшують, знову додають воду до половини пляшки і струшують 10-15 хв., потім доливають воду до горла і залишають на 1-2 години. Утворюється зверху сливкообразный шар відсмоктують піпеткою з балончиком, наносять на підігріте предметне скло, підсушують, фіксують і забарвлюють по Цилю - Нельсену.
Бактеріологічне дослідження застосовують для ідентифікації мікробів, визначення лікарської стійкості, вірулентності і т. д. М. засівають на відповідні живильні середовища - щільні (кров'яний агар) або рідкі (цукровий бульйон, середовища Тароцци), полусинтетическую середу Школьниковой; (цветн. рис. 3 і 4). Виросли на відповідних поживних середовищах мікроби ідентифікують, визначають їх патогенність (в деяких випадках) і лікарську стійкість, попередньо визначають лікарську стійкість всієї флори М. в цілому. Це проводять шляхом посіву шматочків мокротиння, попередньо відмитих фізіологічним розчином, на поверхню кров'яного агару в чашці Петрі. На посів розкладають стандартні антибактеріальні паперові диски. Про чутливості флори судять за величиною зони затримки росту флори навколо диска. Потім проводять остаточне визначення стійкості кожного виділеного з М. виду бактерій окремо. Для цього 18-годинну бульйонну культуру кожного виду бактерій (стафілококи, стрептококи, клебсієли та ін) газоном засівають на чашки Петрі з кров'яним агаром. На газон розкладають стандартні паперові диски з антибіотиками, притискаючи їх пінцетом до поверхні агару так, щоб вони щільно торкалися до аґару всією поверхнею. Чашки залишають при кімнатній температурі на 1,5-2 години; за цей час відбувається достатня дифузія препарату з дисків в навколишні агаровые шари. Потім чашки Петрі поміщають у термостат при t°37° на 18-24 години. Про стійкості досліджуваного штаму судять за зону затримки росту бактерій навколо дисків. При відсутності зони затримки штам вважають стійким. Якщо утворюється зона 1,5-2 см в діаметрі, штам вважають слабо чутливих, а при зоні більше 2 см - чутливим до даного антибіотика.
Про посіву мокротиння на мікобактерії туберкульозу див. Туберкульоз легенів, дослідження мокротиння на мікобактерії туберкульозу; про визначення їх чутливості до антибіотиків див. Туберкульоз легенів, лікарська стійкість мікобактерій.
При біологічному дослідженні М. заражають тварин. В якості діагностичного цей метод витісняється культуральними способами.
