Преципітація - це серологическая реакція, яка полягає у взаємодії розчинного антигену з антитілом з подальшим випаданням дрібнозернистого осаду (преципітату).
Реакція преципітації дозволяє визначити в досліджуваному матеріалі присутність невідомого антигену
шляхом додавання відомого антитіла або за допомогою відомого антигену - невідоме антитіло. Преципітація йде гірше відсутність солей. Оптимум преципітації знаходиться в діапазоні рН=7,0-7,4.
Механізм преципітації близький до механізму аглютинації. Під впливом імунної сироватки, прореагованою з антигеном, зменшується ступінь його дисперсності. Необхідно, щоб сироватка і антиген були абсолютно прозорі. При постановці преципітації можна до одного розведення сироватки додавати різні розведення антигену або навпаки.
Преципітація реєструється краще, якщо антиген нашаровувати в пробірці на антитіло. При цьому спостерігається поява преципітату у вигляді кільця - кольцепреципитация. Кольцепреципитацию проводять у спеціальних пробірках діаметром 2,5-3,5 мм. Для визначення кількості антигенів у досліджуваному матеріалі або різних антитіл у сироватці користуються реакцією преципітації в агарі: 1% освітлений агар розливають в чашки Петрі або на предметні скла. В різні лунки, зроблені в агарі, наливають розчини антигену та антитіла, які дифундують назустріч один одному, утворюючи лінії преципітації. Реакція преципітації широко використовується при діагностиці сибірки (див. реакція Асколі).
Преципітація в агарі дозволяє визначати токсигенність дифтерійних культур.
У судово-медичних дослідженнях преципітація служить для встановлення видової приналежності крові, органів і тканин за допомогою специфічних преципітуючих сироваток.
Преципітація - реакція осадження комплексу антигену (преципитиногена) і антитіла (преципитина). Преципітація - один з імунологічних феноменів, що дозволяють визначити вміст антитіл (див.) у сироватці крові хворих або вакцинованих людей, а також в крові імунізованих тварин. При використанні стандартних сироваток реакція преципітації може бути застосована для титрування різних за походженням розчинних антигенів (див.).
При найбільш простій формі постановки реакції преципітації до ряду пробірок з постійною кількістю антигену додають подслаиванием досліджувану сироватку в серії кратних розведень. Після 30-60 хв. інкубації при кімнатній температурі на межі двох рідин утворюється кільце помутніння - кольцепреципитация. Мінімальна кількість сироватки, яка дає реакцію П., приймають за титр антисироватки. При зворотному постановці реакції зі стандартною антисывороткой вдається оцінити відносну концентрацію антигену в різних біологічних рідинах.
Результати титрування антитіл і антигенів на підставі вищевказаного методу не мають абсолютного кількісного вираження. З метою кількісної оцінки вмісту антитіл Гейдельбергер, Кабат (М. Heidelberger, Тобто Kabat) та ін. розробили кількісний метод реакції преципітації, в основі якого лежить виявлення так звані зони еквівалентності. При змішуванні вікових кількостей антигену з постійними обсягами антисироватки кількість утворення преципітату спочатку зростає, а потім знову знижується через збільшення розчинності комплексу антиген - антитіло в надлишку антигену. Якщо визначити у всіх пробірках вміст антитіл в надосадовій рідині, то виявиться, що в середніх пробірках ряду або навіть єдиною пробірці антитіл в надосадовій рідині немає; разом з тим тут же утворюється найбільший за величиною преципітат. Оскільки в зоні еквівалентності в преципітат залучається також весь антиген, введений в суміш реагуючих речовин, після віднімання з кількості білка преципітату білка антигену отримують точну величину вмісту антитіл у даному обсязі випробуваної сироватки. Вміст білка преципітату після ретельного промивання охолодженим физиол. розчином визначають по азоту або яким-небудь колориметричним методом.
При оцінці значення реакції преципітації як діагностичного методу необхідно враховувати, що в імунних сироватках можуть бути присутні антитіла, що не володіють властивостями преципитинов і, отже, не утворюють преципітату при взаємодії з антигеном. До їх числа належать насамперед неповні антитіла, а також деякі інші антитіла, які належать до групи гамма-глобулінів.
Здатність антисироватки преципітувати антиген може бути порушена нагріванням до 65-70°, обробкою органічними розчинниками, відновленням у кислому середовищі [Изликер (Н. Isliker), А.Я. Кульберг]. Феномен преципітації з антисывороткой, свідомо містить преципитины, можливий лише за певної температури, концентрації солей і водневих іонів. Швидше за все реакція П. протікає при 25-37°. Неодмінна умова утворення преципітату - присутність в ізотонічних концентрацій хлориду натрію (0,85% розчину NaCl). При збільшенні концентрації NaCl до 15% преципітати, утворені антигеном полісахаридної природи, частково розчиняються, чим можна скористатися для отримання чистих антитіл. Реакція преципітації з антигенами білкової природи протікає з однаковою швидкістю і повнотою як в 0,85%, так і в 15% розчинах NaCl. Оптимальна для утворення преципітату концентрація водневих іонів відповідає значенням рН від 5,0 до 9,0.
У лабораторній практиці знаходять застосування різні модифікації реакції преципітації. Зокрема, реакцію термопреципитации застосовують для виявлення антигенів бактерій сибірки, ботулізму та ін., не піддаються термічної денатурації (коктоантигены). Ця реакція відрізняється від реакції кольцепреципитации тільки тим, що в якості антигену використовують фільтрат прокип'яченого досліджуваного матеріалу (див. А сколи реакція).
При аналізі за допомогою реакції преципітації складної суміші антигенів неможливо охарактеризувати властивості окремих компонентів суміші. Для вирішення цієї задачі вдаються до методів преципітації в агарі і до иммуноэлектрофорезу. Метод преципітації в агарі в найбільш поширеною модифікації Оухтерлоню (О. Ouchterlony) заснував на тому, що антиген і антисироватки, диффундируя назустріч один одному в тонкому шарі агару, утворюють при зустрічі лінії П. За кількістю таких ліній можна судити про кількість компонентів, що містяться в даній суміші антигенів. Метод Оухгерлоню дозволяє порівнювати різні антигенні суміші і визначати ступінь споріднення присутніх в них компонентів. При аналізі складної антигенної суміші, що містить речовини з однаковими швидкостями дифузії в агарі, велику допомогу може принести метод іммуноелектрофореза. Суміш антигенів попередньо поділяють в електричному полі в пластинці агару, після чого виявляють окремі компоненти антисывороткой. Антисироватки вносять у рів, пророблений в агарі паралельно лінії, вздовж якої переміщалися при електрофорезі антигени. Кожен з антигенів дає з антисывороткой індивідуальну дугу П. Иммуноэлектрофорез широко застосовують для аналізу патологічних відхилень в білках сироваток, а також при імунологічному аналізі тканинних і бактеріальних антигенів.
Преципітація в судово-медичному відношенні. Преципітація застосовується в судовій медицині для встановлення видової приналежності крові, частин органів і тканин. У ряді слідчих справ потрібно встановити видову приналежність крові, виявленої на знаряддях скоєння злочину, одязі злочинця чи жертви тощо Для реакції преципітації застосовують преципітуючу сироватки, одержувані імунізацією кроликів, півнів, кіз білками різних тварин. Зазвичай виготовляють сироватки, преципітуючу білок людини, коні, кішки, курки, свині, собаки, рогатої худоби. Вони повинні володіти титром не нижче 1:10 000 і бути досить специфічними. З досліджуваної плями або скоринки крові готують витяжки на физиол. розчині, які потім відчувають преципітуючих сироватками. Вид білка вважається встановленим, якщо одна з преципітуючих сироваток утворює преципітат з витяжкою з досліджуваної крові при відповідній контрольній реакції. Реакцією преципітації можна встановити також вид білка тканин і органів людини або тварин. Зазвичай реакцію преципітації проводять в пробірках з конусоподібним кінцем. При отриманні каламутних витяжок реакцію преципітації виробляють в агарі за Оухтерлоню.
