Вірусологічні дослідження

Вірусологічні дослідження - дослідження, призначені для виділення вірусів і вивчення їх властивостей, а також встановлення етіологічного зв'язку вірусів з певними захворюваннями.
Матеріал для дослідження забирається в залежності від місця переважного розмноження вірусів у організмі хворого і від шляхів їх виділення в зовнішнє середовище. Матеріал збирається в стерильну посуд, максимально швидко доставляється в лабораторію і зберігається до дослідження в замороженому вигляді або на льоду. Перед використанням матеріал для виділення вірусів обробляється антибіотиками (пеніцилін і стрептоміцин) для пригнічення сторонньої мікрофлори і піддається центрифугированию для видалення великих частинок.
Виділення вірусів здійснюється шляхом зараження вируссодержащим матеріалом лабораторних тваринах, курячих ембріонів, культури тканин. Вибір способу виділення залежить від передбачуваного збудника захворювання. Так, культури тканин (див.) використовують при роботі з вірусами, не патогенними для лабораторних тварин, або коли віруси в культурі тканин виявляються раніше, ніж при інфікуванні тварин. Курячі ембріони заражають для виділення збудників грипу, інфекційного паротиту (в амніотичну і аллантоисную порожнини), орнітозу (в жовтковий мішок), віспи (на хорионаллантоисную оболонку).
З лабораторних тварин для виділення вірусів найбільш часто використовують білих мишей, потім кроликів, щурів, морських свинок, мавп. Для арбовірусів найбільш ефективно введення вируссодержащего матеріалу в головний або спинний мозок, для пневмотропных вірусів - на слизову оболонку дихальних шляхів, для вірусів віспи, герпесу - на скарифицированную рогівку.
Виділення вірусів найбільш ефективно в гострому періоді захворювання. Істотним моментом у встановленні вірусної природи захворювання є результати серологічних досліджень сироваток, взятих повторно від одного і того ж хворого на початку захворювання і в період реконвалесценції. Виявлення антитіл до виділених вірусів у другій сироватці в титрі в 4 і більше разів більше, ніж у першій, вказує на етіологічну зв'язок вірусів з даним захворюванням.
Раннім і швидким методом виявлення вірусних антигенів є метод флуоресцентних антитіл, заснований на специфічній фіксації мічених флюорохромом антитіл на поверхні антигену. Антиген легко виявляється при люмінесцентній мікроскопії (див.) завдяки яскравій флюоресценції адсорбованих на антигені антитіл. Методом флуоресцентних антитіл досліджують мазки, взяті від хворих, гістологічні зрізи уражених тканин, препарати з культури тканин. Для виявлення елементарних тілець (віріонів) застосовують також електронну мікроскопію (див.). З інших морфологічних методів використовують ті, які виявляють внутрішньоклітинні вірусні включення в зрізах уражених органів і тканин. Виявлення включень свідчить про інфекції і в ряді випадків сприяє постановці діагнозу вірусного захворювання. Для виявлення вірусних антитіл у крові хворих і для вивчення антигенної структури вірусів застосовують різні серологічні реакції. Реакцію нейтралізації застосовують майже при всіх вірусних інфекціях. Вона заснована на здатності антитіл імунної сироватки нейтралізувати інфекційні властивості вірусів при введенні суміші в організм сприйнятливих тварин або в культуру тканин. Для визначення індексу нейтралізації постійну дозу сироватки змішують з різними розведеннями вірусів, а для визначення титру антитіл - різні розведення сироватки з постійною дозою вірусів. Контролем служить зараження тварин (або культури тканин) сумішшю вірусів з нормальною сироваткою або з фізіологічним розчином. Реакцію нейтралізації ставлять не тільки для виявлення антитіл, але і для визначення виду і типу вірусів.
Реакція зв'язування комплементу [наприклад, Борде - Жангу реакція (див.)] використовується для виявлення як вірусних антигенів, так і антитіл. У першому випадку в реакції взаємодіють свідомо відома імунна сироватка і матеріал, в якому передбачається наявність антигенів: сироватка крові, носоглоточные змиви, екстракти тканин інфікованого організму. У другому випадку - завідомо відомий антиген (діагностикум) і сироватка хворого або реконвалесцента.
РЗК використовується для діагностики захворювань, що викликаються вірусами грипу, віспи, поліомієліту, свинки, аденовірусами та арбовирусами.
Реакція преципітації в агарі заснована на утворенні смуги преципітації на місці контакту антигену з антитілами в шарі агару між лунками, заповненими вірусним антигеном і імунною сироваткою. Реакцію застосовують для вивчення антигенної структури вірусів і для діагностики деяких інфекцій - віспи, поліомієліту, епідемічного гепатиту.
Реакцію гемаглютинації, засновану на властивості багатьох вірусів викликати аглютинацію (склеювання) еритроцитів різних тварин (курей, гусей, морських свинок) і людини, використовують для виявлення вірусів. Антивірусна сироватка пригнічує гемагглютинирующую активність вірусів, і це явище під назвою реакції гальмування гемаглютинації (РГГА) широко використовують для діагностики грипу, свинки, віспи, деяких енцефалітів.