У більшості робіт для оцінки антитілоутворення автори користуються визначенням титру антитіл. Однак наявні дані говорять про фізико-хімічної неоднорідності антитіл. Тому сумарна їх характеристика недостатня. Залежно від вікових особливостей організму і характеру імунізації розрізняють три групи імунних глобулінів (антитіл). На ранній стадії иммунизаторного процесу утворюються макроглобулиновые антитіла (19S), а в подальшому γ-глобулінові (7S). Відомо, що 7S антитіла володіють більшою специфічністю, однак в реакціях аглютинації вони значно менш ефективні і для отримання рівного рівня реакції необхідно більша кількість їх, ніж 19S, антитіл.
Е. В. Чернохвостова (1965) вважає, що в даний час не можна характеризувати імунологічні процеси загальним визначенням антитіл.
Для диференційованого визначення антитіл, різних за фізико-хімічними властивостями, запропоновано ряд проб. Найбільш простим і доступним є метод, заснований на виборчій руйнуванні макроглобуліном зменшує речовинами, що містять сульфгідрильні групи (меркаптоэтанол, цистеамін, цистеїн, глютатіон та ін).
Deutsch, Morton (1958), Kunkel (1960) встановили, що додавання сульфгідрильних сполук веде до розриву дисульфідних містків і розпаду молекули макроглобуліну, γ-глобулінові ж антитіла стійкі до дії цих сполук. Достовірність даної методики підтверджено рядом досліджень (Е. В. Чернохвостова, 1965; Fink et al., 1962; Lospalluto et al., 1952; Bauer et al., 1963; Uhr et al., 1963, і ін).
Для диференціювання імунних антитіл, які визначаються у жінок, які перебувають у безплідному шлюбі, нами використана методика обробки сироватки крові цистеїном. Для дослідження були відібрані 9 жінок, у яких реакція микроагглютинации була різко позитивною, і одна жінка з позитивною реакцією. У даній групі після попереднього обстеження специфічне лікування не проводилося.
Перед постановкою досвіду попередньо була визначена необхідна доза цистеїну, що гарантує повну інактивацію макроглобулиновых антитіл. Робота проводилася зі стандартною черевнотифозної сироваткою. Доведено, що слід вживати 0,2 м розчину солянокислого цистеїну, додавання якого знижувало титр 19S антитіл більш ніж у 3 рази.
У жінок брали 4-5 мл крові після центрифугування відділяли по 1 мл сироватки. Розчин цистеїну готували безпосередньо для досвіду; 167 мг речовини розчиняли в 5 мл 0,2 м розчину NaOH. Контроль рН розчину проводили бромтимолсиним індикатором (синьо-зелене забарвлення). Готували 20 маленьких пробірок з пробками (10 контроль і 10 досвід), в які поміщали при відповідній оцінці по 0,5 мл сироватки крові: кожен мілілітр сироватки обстежуваної жінки розливали по 0,5 мл у дві пробірки (досвід і контроль). Далі в пробірки з позначкою Про (досвід) додавали по 0,5 мл розчину цистеїну, а з позначкою (контроль) - по 0,5 мл фізіологічного розчину. Всі пробірки, що герметично закривали пробками, щоб не допустити окислювання цистеїну киснем повітря, і протягом 22 годин витримували в термостаті при температурі 37°.
Реакцію микроагглютинации проводили за методикою, описаною раніше. Проте в даному випадку визначали титр антитіл, для чого сироватку крові в досліді і контролі розводили послідовно в серії пробірок у співвідношенні: 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, 1:128, 1:256, 1:512, 1:512 і 1:1024.
Реакцію микроагглютинации визначали з сироватками крові при всіх розведеннях. У разі повної іммобілізації сперміїв констатували, при якому граничному титрі антитіл зазначалося даний стан, а потім фіксували титр антитіл, що викликає порушення рухливості насіннєвих ниток. Отримані дані представлені в табл. 28.
З таблиці видно, що у всіх випадках, коли при попередньому обстеженні реакція микроагглютинации визначалася позитивною, при подальшої її перевірки з обробкою сироватки крові цистеїном проба була позитивною. Якщо повне припинення рухливості сперміїв протягом перших двох годин в досліді та контролі в середньому визначалося при титрі 1:16, то явне порушення рухливості насіннєвих ниток (більш ніж на 20%) при значно більшому титрі антитіл. З іншого боку, при більш високому титрі антитіл (в середньому 1:256) відзначалася повна іммобілізація насіннєвих ниток протягом перших 2 годин дослідження, а при низькому(1:32, 1:64) - лише зниження відсотка рухливості сперміїв.
Можна відзначити і таку залежність: із 10 обстежених жінок, за даними всіх проведених раніше досліджень, наявність сенсибілізації до спермиям можна було припустити в 5, і в 5 цей стан було сумнівним. З табл. 28 видно, що у другої групи жінок (спостереження 1,5,6,7,10) титр імунних антитіл був нижче, ніж у першій.
За даними Garsia і Perez (1959), для викликання безпліддя титр спермаагглютининов в сироватці крові жінок повинен бути не менше 1:100. На думку авторів, при вливанні еякуляту у піхві в нормі титр утворюються антитіл може досягати 1:25, при цьому стерильність виникати не має. За даними В. Ф. Левицького (1968), у жінок, які не мають дітей, вкрай рідко вдається виявити антитіла по відношенню до спермиям, причому титр їх низький (1:10).
З табл. 28 випливає, що визначаються в сироватці крові антитіла є, мабуть, імунними 7S глобулінами, а не 19S макроглобулинами. Деяке зниження в окремих спостереженнях титру антитіл відбувається в межах помилки методики, так як достовірне визначення кількості макроглобулиновых антитіл можливо лише при зниженні титру більш ніж в 2-4 рази. Результати проведеної роботи свідчать про відсутність у сироватці крові обстежуваних жінок 19S антитіл або ж наявність їх в титрі, нижчому, ніж γ-глобулінових антитіл.
