Визначення гемоглобіну здійснюється методами концентраційної колориметрії. Одним з найпростіших колориметров є візуальний гемометр типу ГС-3 по Салі, до цього часу найбільш поширений в мережі лабораторій країни. В основі визначення гемоглобіну лежить метод розбавлення. Солянокислий гематин, що утворюється при змішуванні крові з розчином соляної кислоти, розбавляється в градуйованою пробірці до збігу кольору розчину з кольором стандартів гемометра. Кількість гемоглобіну відраховується за рівнем розбавленого розчину і по розподілах градуйованою пробірки.
Деякі практичні відомості, які треба враховувати при роботі з гемометром типу Салі [27].
1. Рідинні кольорові стандарти з часом слабшають, що призводить при роботі з ними до завищення результатів. Цього можна уникнути, якщо проводити обов'язкову періодичну перевірку гемометров.
2. Не можна застосовувати пробірки від одного гемометра для роботи на іншому гемометре. У кожному гемометре градуйована пробірка і запаяні кольорові стандарти підібрані таким чином, що відстань між відмітками пробірок і стандартів одного комплекту однаково. Це означає, що їх внутрішні діаметри також рівні. Рівність внутрішніх діаметрів пробірки і стандартів є неодмінною умовою для правильності показань гемометра.
3. Необхідно строго дотримувати час від моменту розведення до відліку, оскільки забарвлення гематина не стабільна в часі. При роботі з гемометром ГС-3 це дорівнює 5 хв. Помилка визначення навіть при дотриманні всіх рекомендованих умов може складати ±10% [27].
Вицвітання забарвлення стандартного розчину, використовуваного в гемометрах Салі, робить їх непридатними для науково-дослідних робіт і змушує з великою обережністю застосовувати у медичній практиці [8]. Більш точними є методи фотоколориметрии і спектрофотометрії, докладно описані в розділі 3.
При розробці і випуску гемоглобинометров однією з найважливіших проблем є стандартизація показань приладів. Як і всі вимірювальні засоби, гемоглобинометры треба градуювати при випуску і перевіряти правильність їх показань при експлуатації. До недавнього часу фотоелектричні гемоглобинометры градуировались за оксигемоглобину, який, як виявилося, давав завищення на 5 і більше відсотків [27].
В останні роки в багатьох країнах в якості стандартного прийнятий цианметгемоглобиновый (гемиглобинцианидный) фотометричний метод градуювання гемоглобинометров [40], головна перевага якого полягає у високій стабільності розчину гемиглобинцианида. Піддані спеціальній обробці і запаяні в пробірках, ампулах або флаконах, ці стандарти довго зберігаються незмінними. Вони можуть бути переслані в будь-яке місце країни і за ними легко зробити перевірку гемоглобинометра і провести відповідну корекцію приладу.
Цей метод прийнятий в якості стандартного Міжнародним комітетом по стандартизації в гематології при Європейському суспільстві гематологів. Однак реактив, який застосовується для визначення (трансформування) гемоглобіну крові, містить ціаністий калій у кількості 50 мг на літр (реактив Драпкіна). Є рішення про введення в нашій країні гемиглобинцианидного методу визначення гемоглобіну, але замість токсичного ціаністого калію в ньому застосовується менш токсичний і більш доступний ацетонциангидрин, з розрахунку 0,5 мл ацетонциангидрина на 1 л розчину. Принципової різниці заміна реактивів не викликає, так як кінцевий продукт - гемиглобинцианид - в обох випадках один і той же.
Всі гемоглобинометры, які градуированы за якимось іншим методом, повинні бути вивірені за гемиглобинцианидному (ацетонциангидриновому) методом. Зазвичай це робиться шляхом паралельного визначення вмісту гемоглобіну в пробі ацетонцианидным методом із застосуванням спектрофотометра і на наявному приладі. Зазвичай перевіряють не менше трьох точок. Вихідними даними є отримані на спектрофотометрі.
В СРСР розроблено гемоглобінометр фотоелектричний ГФ-3, який забезпечений скляній циліндричної зливний кюветою. Як зазвичай, необхідну кількість крові для аналізу - 0,02 мл, загальний об'єм проби - 5 мл.
Певні зручності представляють портативні фотоелектричні гемоглобинометры. До таких приладів можуть бути віднесені «Гемотест», що випускається в Данії, прилади фірми «Лару Льюнгберг» (Швеція), ЭЭЛ (Англія) і ін У цих гемоглобинометрах результат аналізу зчитується зі шкали приладу, отградуированного в г% гемоглобіну.
Одним з таких приладів є Гемолюкс АМ-101 [32]. Живлення приладу здійснюється від батареї. Маса приладу, разом з харчуванням - 0,5 кг (рис. 129). Підготовлений у пробірках розчин гемоглобіну крові засмоктується в кювету шляхом натискання кнопки, і так само за допомогою кнопки виштовхується з кювети. Під час дослідження усмоктувальна трубка почергово занурюється в пробірки з підготовленими пробами. Результати аналізу зчитуються з цифрового табло в м%. Габаритні розміри приладу - 172X63X47 мм. Заряд однієї батареї розрахований на 3000 вимірювань.
Рис. 129. Гемоглобінометр «Гемо-люкс AM-101».
