У 1932 р. Baskin для визначення імунологічних взаємовідносин між подружжям запропонував тест микроагглютинации. За цією методикою доводиться присутність специфічних антитіл у сироватці крові жінки або чоловіка. Методика згодом була дещо змінена (Kibrik, 1952; Papasov, Entshew, 1963).
Papasov, Entshew (1963), використовуючи метод микроагглютинации, виявили антитіла у жінок у 18,8% спостережень.
Franklin і Dukes (1964) у випадках відносного безпліддя констатували наявність циркулюючих в крові антитіл за методикою микроагглютинации в 78,9% спостережень. У 1966 р. Bandhauer при обстеженні 498 чоловіків за методикою Кібрика у 29 виявив позитивний тест аглютинації сперматозоїдів.
Fjallbraht (1965) наводить дані обстеження тесту Кібрика у 263 чоловіків, які перебувають у безплідному шлюбі, причому у 3,4% були виявлені антитіла. Фактор аглютинації або іммобілізації насіннєвих ниток цілком може обумовлювати відсутність проникнення сперматозоїдів через цервікальний канал. Fjallbraht (1968) наводить цікаві дані обстеження досить великої кількості пацієнтів. Він розглядає три групи: 1) чоловіки, що складаються в безплідному шлюбі (400 спостережень), 2) чоловіки, які складаються в «плодовитом» шлюб (500 спостережень), 3) група без певного відбору - чоловіки - донори крові (500 спостережень). У всіх трьох групах чоловіки були приблизно одного віку. Про наявність аутоантитіл Fjallbraht судив по тесту Кібрика і в 36 спостереженнях була простежена проба Шуварского-Гунера. В результаті досліджень на наявність антитіл у сироватці крові чоловіків цих трьох груп виявлено відповідно в 6,8; 2,6 і 4,8% випадків. За даними автора, який проводив ретельне урологічне обстеження чоловіків, наявність аутоантитіл частіше констатувалося при ураженні testis запального характеру.
За Baskin, сироватку крові обстеженої жінки змішували зі сперміями чоловіка і по наявності аглютинації насіннєвих ниток судили про сенсибілізації організму подружжя. За Kibrik, еякулят розводять фізіологічним розчином так, щоб в 1 мл його було 40 млн. сперміїв (рухомих насіннєвих ниток). Приготовлену таким чином сперму змішують з рівним об'ємом 10% розчину желатини. Потім частина цього антигену змішують з рівним об'ємом сироватки крові досліджуваній жінки. Сироватка може застосовуватися в різному розведенні: 1 : 2, 1 : 4 і т. д. Реакцію проводять у пробірках, які поміщають в термостат при температурі 37° на 2 години. Потім через кожні 30 хвилин визначають під мікроскопом відсоток рухливих сперміїв і наявність конгломератів агглютинированных насіннєвих ниток.
Термін «микроагглютинация» - навряд чи можна вважати цілком підходящим для даної методики, так як в основному спостерігається лише зниження активності руху сперміїв в реакції порівняно з контролем.
У своїй роботі ми використовували реакцію микроагглютинации в модифікації Енчева. Визначення вели наступним чином. Брали 3-5 мл крові з вени і відразу (центрифугуванням) відокремлювали сироватку. На 5 предметних стеклах готували наступні варіанти: 1) краплю суспензії сперміїв з подружжя, в 1 мл якої повинно бути близько 20 000 000 насіннєвих ниток (контроль); 2) крапля суспензії сперміїв з іншого чоловіка тієї ж концентрації (контроль); 3) краплю сироватки дружини, добре змішаної з краплею суспензії насіннєвих ниток дружина (досвід); .4) краплю сироватки-обстежуваної жінки з суспензією сперміїв іншого чоловіка (контроль); 5) краплю сироватки крові іншої жінки, змішаної з краплею суспензії обстежуваного дружина (контроль).
Краю покривного скла змащували парафіном (останнє виключало швидке висихання краплі). Всі препарати витримували в термостаті при 37° протягом 6 годин.
За цей час кожні 30 хвилин під мікроскопом робили підрахунок відсотка рухливих сперміїв у всіх препаратах. Проба вважалася позитивною в тому випадку, якщо в препараті № 3 відбулося значне зниження рухливості насіннєвих ниток в порівнянні з іншими контрольними. Чим швидше наступала іммобілізація сперміїв, тим вище був титр антитіл в сироватці крові.
За Horky (1968), для констатації антитіл, що розглядаються як причина безпліддя, протягом перших 6 годин в третьому препараті має настати повна іммобілізація сперміїв при збереженні їх рухливості в контролі.
Для приготування суспензії по Енчеву проводять центрифугування еякуляту з подальшим його розбавленням фізіологічним розчином так, щоб в 1 мл розчину містилося 20 000 000 сперміїв. Для більш точної диференціації титру антитіл можна користуватися сироваткою крові в різному її розведенні.
При вирішенні питання про результати проби ми відзначали зниження рухливості в препараті № 3 у порівнянні з контролями. Реакція микроагглютинации з 228 жінок була позитивна у 44 (19,3%), причому у 18-різко позитивна, у 147 (64,5%)-негативна, у 37 (16,2%)-сумнівна. З 228 чоловіків вона була позитивною у 15 (6,6%), причому у 8-різко позитивна, у 143 (62,7%)-негативну та у 70 (30,7%)-сумнівна. Детальний аналіз отриманих результатів наведено в наступному розділі.
При наступному повному знерухомленні сперміїв в досвіді (26 випадків), що частіше визначалося протягом перших 2 годин спостереження, при збереженні рухливості в контролях ми говорили про різко позитивній пробі. Позитивним результат вважали в тому випадку, якщо протягом перших 2 годин активна рухливість (при нормоспермии) у досвіді знижувалася більш ніж на 20% або більше 50% за 6 годин при збереженні кращої рухливості в контролях. Рішення цього питання було скрутним у випадках патології еякуляту, коли взагалі в перші 3-6 годин після еякуляції завжди настає акиноспермия (знерухомлення). Все сказане вище пояснює Досить великий відсоток сумнівних результатів, особливо у випадках патології сперми. Взагалі ж, на нашу думку, для вирішення питання про результаті реакції микроагглютинации досить перегляду протягом перших 2 годин, бо ми не спостерігали зміни діагнозів в залежності від переглядів препарату після 2 годин попереднього спостереження, коли в досліді і контролі рухливість найчастіше значно порушувалася.
На закінчення слід сказати, що реакція микроагглютинации є досить суб'єктивним тестом, а методика її проведення досить трудомісткою.
