Мікробіологічні методи дослідження зводяться зазвичай до вивчення забрудненості зубних порошків і паст в процесі їх виробництва, а також до визначення антимікробної (фунгіцидної дії зубних гігієнічних засобів по відношенню до культур різних мікробів.
Визначення бактерицидних властивостей зубних паст, порошків та еліксирів виробляють одним з методів дифузії досліджуваного гігієнічного препарату в агар способом лунок. У стерильні чашки Петрі наливають по 20 мл поживного агару. Товщина агарового шару впливає на результати визначення, тому потрібно суворо дотримуватися вказану кількість живильного середовища. В якості поживних середовищ застосовували мясопептонний агар (МПА) - для стафілокока, томатний агар - для лактобактерій і агар Сабуро на дріжджовий води - для дріжджоподібних грибків типу Candida. Для отримання газонів готують суспензії тест-культур густиною 500 000 мікробних тіл в 1 мл Стандартизацію мікробних суспензій проводять за стандартом каламутності ЦГНКИ. Використовують 24 - і 48-годинні (лактобактерії) культури.
На поверхню поживного агару наливають 1 мл суспензії випробуваної культури. Погойдуванням чашки розподіляють суспензія по всій поверхні агару, надлишок мікробної суспензії видаляють пастерівської піпеткою. Чашки протягом 30 хв витримують при кімнатній температурі, після чого в агарі пробуравливают лунки (д = 6 мм), які повинні бути розташовані на рівній відстані один від одного, в 25 мм від центру чашки і 20 мм від її краю. Із зубного порошку готують пасту на фізіологічному розчині, попередньо эмульгировав його в розчині твіну-80 (0,1%), а зубні пасти беруть безпосередньо з туби. Кількість лунок не повинно перевищувати шести. Лунки заповнюють випробуваної пастою. Чашки протягом 30 хв залишають при кімнатній температурі, а потім, не перевертаючи, поміщають в термостат при температурі 37° С на 16 - 24 і 48 (лактобактерії) годин. Для більшої достовірності результатів випробування кожної пасти необхідно проводити на двох чашках.
Зони пригнічення росту вимірюють міліметровою лінійкою, включаючи діаметр лунки. За розмірами зон судять про антимикробном дії паст, тобто про ступінь чутливості тест-мікробів до випробуваним зубних паст. Зона до 15 мм свідчить про малої чутливості тест-мікроба, 16-25 мм - про вираженою, зона понад 25 мм - про високої чутливості.
Паралельно з цим проводять вивчення антимікробних властивостей зубних порошків і паст методом серійних розведень у рідкому поживному середовищі - м'ясопептонному бульйоні (відносно стрептококів, стафілококів, грибків) і в середовищі гідролізованого молока (щодо молочнокислих бактерій). Цей метод дозволяє встановити мінімальні концентрації паст і порошків, затримують ріст бактерій. Для отримання вихідних емульсій зубні порошки (оскільки вони не розчиняються в рідкому поживному середовищі) також необхідно розчинити в твине-80 (0,1%). Мікробну суспензію вносять з розрахунку 500 ТОВ мікробних тіл на 1 мл середовища. Тест-культурами доцільно брати типові штами Staphylococcus aureus 209 (музейний штам), Lactobacterium casei NCDO-151 (з міжнародного набору типових культур), Candida albicans 67/846 (з Ленінградського НДІ антибіотиків), Streptococcus faecalis 4/63 РН «NCTC 370» (з Державного контрольного інституту медичних біологічних препаратів). Ми застосовували також патогенні штами стафілокока, виділені з патологічних ясенних кишень хворих пародонтозом, лактобактерій, отриманих із зубного нальоту хворих з множинними кариозными ураженнями зубів, і дріжджоподібних грибків роду Candida, виділених від хворих з кандидозным ураженням слизової оболонки.
Зубний порошок досліджують у розведенні 1 : 2 і 1:4. Контактіруемие суміші інкубують при температурі 37° С. Через 1 хв проводять пересів у кількості 0,1 мл на різні тверді поживні середовища залежно від використаного тест-мікроба на м'ясо-пептонний агар (Streptococcus faecalis, Staphylococcus aureus), на томатний агар (Lactobacterium casei), на середовище Сабуро (Candida albicans). Вторинний пересівання проводять через 3 хв, а третій - після 24-годинної витримки контактних сумішей в пробірках при температурі 37° С. Результати враховують через 48 год. В контролі мікробну суспензію додають у відповідну живильне середовище без введення зубного порошку.
При необхідності проводяться додаткові дослідження з вивчення бактеріальної забрудненості паст і порошків, їх впливу на флору ясенних кишень та ін.
Так, для вивчення бактеріального забруднення зубних порошків або паст готують їх розведення в фізіологічному розчині, від 1 : 2 до 1 : 100 (попередньо эмульгируя їх в твине). З отриманих розведень отсевают по 0,1 мл на поверхню твердих поживних середовищ в чашки Петрі на м'ясо-пептонний агар (МПА) з додаванням 5% баранячої крові, середовища Ендо та Сабуро. Суспензії розподіляють по поверхні поживного агару шпателем. Поряд з цим проводиться посів на м'ясо-пептонний бульйон. Перевіряють вміст в порошках і пастах бактерій кишкової групи, гноєтворних коків, спорових мікроорганізмів, плісеневих грибків і дріжджів. При цьому враховують розходження в кількісному змісті і видовий склад мікроорганізмів.
Все викладене у цьому розділі можна цілком використовувати при вивченні властивостей зубних еліксирів для дослідження їх антимікробної дії і бактеріальної забрудненості.
