Приставки для виміру флуоресценції до спектрального колориметру «Спекол» (НДР) можуть працювати від ртутної лампи та від лампи розжарювання. Випромінювання збудження флуоресценції виділяється інтерференційними фільтрами в ультрафіолетовій ділянці спектру, а дифракційної гратами - видимому.
Є приставка для прямокутної кювети об'ємом 1,5 мл і приставка для циліндричної кювети (пробірки) діаметром 16 мм для обсягу близько 5 мл або більше.
Флуоресценція під кутом 90° сприймається фотоелементом, перед яким вставляються змінні вторинні світлофільтри. При дослідженнях флуоресценції підключається додатковий підсилювач постійного струму, який посилює фотострум у 106 разів.
Реєструючий прилад - мікроамперметр, шкала якого градуйована по пропусканню 0-100% і оптичної щільності від 2 до 0. Еталоном служить стандарт з що флуоресціює скла або розчин хініну відомої концентрації. Чутливість приладу в режимі флуориметрии 1·10-8 м/мл хініну відхиляє стрілку мікроамперметра на 10 поділок.
Висока чутливість флуоресцентного аналізу приваблює дослідників багатьох спеціальностей, в тому числі медиків і біологів, оскільки досліджувані ними речовини присутні в нанограммовых кількостях (10-9 м) і менше, і ці речовини треба не тільки виявити, але і кількісно оцінити. За останні два десятиліття було розроблено значну кількість флуориметров, які з плином часу зазнали вдосконалення в напрямку підвищення чутливості, точності і стабільності.
У поданій вище табл. 12 наведено основні параметри флуориметров, розроблених та випущених за період з 1955 по 1970 р.
Згідно авторам огляду кращими по конструкції флуориметрами є двоканальні прилади з компенсацією, модуляцією світлового потоку, з реєстрацією по нуль-індикатором і з одним приймачем випромінювання.
Подальше удосконалення флуориметров має бути спрямоване на запровадження микрокювет, зливних і проточних кювет для збільшення продуктивності приладу, обладнання приладів термостатом, криостатом.
Так само, як розвиток абсорбциометрического аналізу призвело до створення сучасних спектрофотометрів, розвиток і поглиблення флуориметричного аналізу призвело до створення спектрофлуориметров.
При розробці приладів стало ясно, що для зняття спектру збудження вже недостатньо ртутної лампи, яка дає кілька окремих ліній. Потрібний був прилад, що дозволяє порушувати флуоресценцію монохроматичним світлом будь-якої довжини хвилі як у видимій, так і в ультрафіолетовій області (тобто діапазоні 200-800 нм). Спектрофлуориметр дозволяє реєструвати випромінену флуоресценцію в настільки ж широкою області для отримання спектрів збудження та флуоресценції.
За кордоном багато уваги приділяється розробці спектрофлуориметров, як правило, призначених для проведення наукових досліджень при вивченні будови речовин.
Для пояснення взаємозв'язку окремих частин спектрофлуориметра на рис. 87 зображена блок-схема приладу. Блок живлення 1 забезпечує харчуванням елементи схеми. Випромінювання джерела збудження 2 (найчастіше ксенонової лампи в кварцовому балоні) потрапляє на перший монохроматор 3, виділяє монохроматичне випромінювання, яке в свою чергу надходить на досліджуване речовина 4. Виникає випромінювання флуоресценції, пройшовши другий монохроматор 5, сприймається приймачем випромінювання 6 і після підсилювача 7 надходить на вимірювач або реєстратор 8.
Рис. 87. Блок-схема спектрофлуориметра.
Пояснення в тексті.
Слід, однак, зазначити, що на звичайному, нескорректированном спектрофлуориметре отримані спектри значною мірою спотворені, що виражається у відсутності пропорційності при записі окремих ділянок спектра. Це викликано насамперед особливостями спектральної характеристики фотопомножувача, чутливість якого по діапазону неоднорідна і має форму опуклої кривої. Певною мірою нерівномірність запису спектра залежить від призменного монохроматора, оскільки розкриття щілини по ходу запису змінюється.
Для отримання істинного спектру флуоресценції, який би міг бути використаний для порівняння та ідентифікації речовин, дослідникам доводиться вдаватися до корекції отриманих спектрів. Творці приладів вносять в їх конструкції відповідні удосконалення, що дозволяють вести автоматичну корекцію спектра, що є досить складним завданням.
