Концентрацію фарби і тривалість забарвлення підбирають залежно від якості фарби, води, температури повітря фарбуванням на пробу декількох непотрібних мазків. Добре пофарбовані мазки мають фіолетове забарвлення. Модифікація забарвлення Романовського - Гимзы за Нохту: готують окремо розчини еозину і азура-II в розведенні 1: 1000. Перед вживанням змішують 10 мл розчину еозину, 15 мл розчину азура-II і 25 мл води. Якщо мазки виявляються після фарбування червоними, трохи збільшують в суміші обсяг азура II, якщо синіми збільшують обсяг еозину. Техніка фарбування - фіксовані мазки кладуть на містки, зроблені з скляних паличок і спираються на краю кювети, і заливають можливо великим шаром фарби; після закінчення часу забарвлення мазки змивають струменем води і ставлять вертикально для просушування. Для підрахунку лейкоцитарної формули (див.) необхідно під імерсійної системою знайти 200 клітин, визначити їх вид, зареєструвати окремо клітини кожного виду і вирахувати процентне співвідношення. Підрахунок потрібно вести в більш тонкої частини мазка, де еритроцити лежать окремо. Лейкоцити в мазку розподіляються нерівномірно, тому його слід пересувати від верхнього краю до нижнього, потім переглядати 2-3 поля зору уздовж краю, потім мазок пересувати в зворотному напрямку і т. д. (рис. 5,1).
 Рис. 5. Способи (1 і 2)пересування мазка крові при підрахунку лейкоцитарної формули. |
При іншому способі (рис. 5,2) переглядають 3-4 поля зору уздовж краю, стільки ж досередини мазка, стільки ж убік паралельно краю, назад до краю і далі те ж саме до підрахунку 50 клітин. Вибирають чотири таких ділянки по чотирьох краях мазка. При наявності одиннадцатиклавишного лічильника залишається розділити отримані на ньому для кожного виду лейкоцитів навпіл і записати формулу. Якщо лічильника немає, на папері пишуть назви всіх видів лейкоцитів і кожну знайдену клітку відзначають проти її назви, поки всіх не буде 200. Результат ділять навпіл. Під час підрахунку звертають увагу на характер еритроцитів, їх величину, форму, забарвлення.
Ретикулоцити - юні еритроцити, дозревающие в струмі крові. При суправитальной (тобто на кордоні між життям і смертю) фарбуванні деякими лужними барвниками у них виявляється зернисто-сітчаста субстанція. У нормі кількість їх становить 5-8 на 1000 зрілих еритроцитів. Зміна числа ретикулоцитів дозволяє судити про ерітропоетіческой функції кісткового мозку (див. Кровотворення). Так, підвищення їх числа спостерігається після крововтрат, при гемолітичній анемії, у перший тиждень ефективного лікування перніциозної анемії, зниження - при апластичній та нелікованої перніциозної анемії. Для їх підрахунку застосовують спеціально пофарбовані мазки крові. Барвник Н. Р. Алексєєва: 5 г цитрату натрію і 0,4 г хлориду натрію розчиняють в 45 мл дистильованої води. Цим розчином заливають 1 р азура-II, поміщеного в эрленмейеровскую колбу ємністю 100 мл, нагрівають через азбестову сітку до кипіння. Охолоджену рідину фільтрують. В центріфужную пробірку наливають барвник в обсязі 50 поділок капіляра Панченкова. Після уколу пальця кровм швидко набирають у той же капіляр 2 рази по 100 поділок, виливають у пробірку з барвником, добре розмішують, закривають пробкою, залишають на 30-120 хв. Знову добре розмішують і роблять тонкі мазки. Висохлий мазок фіксують і забарвлюють за методом Романовського - Гимзы або розглядають без фіксації і додаткової забарвлення через іммерсійне об'єктив, вклавши в окуляр паперове віконце для зменшення поля зору. Підраховують по полях зору еритроцити і окремо ретикулоцити. Вони відрізняються наявністю зерняток сіточки або синього кольору. Кількість ретикулоцитів виражають у числі їх на 1000 еритроцитів. У тому ж мазку можна підрахувати і тромбоцити, вони пофарбовані в синій колір. Їх число також підраховують на 1000 еритроцитів, а потім, знаючи кількість останніх в 1 мм3, вираховують вміст тромбоцитів в тому ж обсязі. Приклад: на 1000 еритроцитів припадає 45 тромбоцитів. Еритроцитів - 4 500 000 в 1 мм3 крові.
Тромбоцитів - (4 500 000X45)/1000= 202 500 в 1 мм3. См. також Гемоглобін.
