У зв'язку з тим що спермії містять кілька антигенів (а з часом їх буде, мабуть, виявлено кілька десятків), що з'єднуються з відповідними антитілами, смуг преципітації може бути кілька. У той же час слід враховувати, що антитіла в антисыворотках і антигени в спермиях можуть перебувати не в еквівалентних відносинах і частина ліній преципітації може не утворюватися.
Katsh і Matchael (1962) запропоновано багато різних модифікацій методики подвійної дифузії (преципітації) в агарі. Додаткові забарвлення значно розширюють можливості досвіду. Автори, беручи в якості антигену еякулят, використовували фарбування червоним биоцином. Дослідники прийшли до висновку, що лінії преципітації були погано видимими і досить швидко зникали, в результаті чого дані реакції виявлялися сумнівними. Потім Katsh і Matchael використовували попереднє забарвлення антитіл 1% розчином кристалічного гематоксиліну в пропорції 1 : 2. Цю суміш диализировали в мембранах діалізу Visking протягом 12-24 годин. При подібній обробці антитіл реакція закінчується через 4 години, а лінії преципітації видно досить чітко.
За даними Riko (1965), метод преципітації в агарі може бути цілком використаний для визначення антитіл
по відношенню до спермиям. Dukes (1965) застосовував метод микроагглютинации і преципітації в гелі, і, маючи велику кількість спостережень (487), порівнював п'ять груп пацієнтів: 1) первинно неплідні подружжя, які стоять на обліку в американській асоціації по безпліддя; 2) своєрідна контрольна група, де при наявності безпліддя були відомі причини, що ведуть до нього (ендометріоз, міоми, ановуляторний цикл у жінок; патологія сперми у чоловіків); 3) група пацієнтів, у родинах яких були діти («явно плодовиті»), 4) не «явно плодовиті». Ця група складалася з жінок, які перебувають у шлюбі і предохраняющихся; 5) група вторинно неплідних жінок, що є «на сьогодні здоровими». Антитіла у жінок по відношенню до спермиям виявлені відповідно у 67,2, 15,9, 9,1, 7,1% і 20,1%. З наведеного матеріалу видно, що найбільший відсоток виявлення антитіл є в групі первинно неплідних жінок. Dukes, об'єднуючи першу, другу та п'яту групи, куди входили тільки марні, у середньому у 25 виявив наявність антитіл. На думку автора, це говорить про важливість розглянутого фактора в безплідному шлюбі.
Ми проводили реакцію подвійний микродиффузии в агарі, використовуючи для цього описане вище спеціальне покривне скло з п'ятьма колодязями, а також попередню обробку антигену 5,7% сірчаною кислотою, а сироватки крові та слизу цервікального каналу-гематоксилином. При дослідженні 228 жінок отримані такі результати: з сироваткою крові реакція була позитивною у 33 (16,7%), негативною - у 180 (78,9%), сумнівною - у 10 (4,4%), зі слизом цервікального каналу - відповідно у 40 (17,5%), 173 (75,9%) і 15 (6,6%). Збіг (+) результатів по двох цим дослідженням виявлено у 32 випадках. У чоловіків преципітація з сироваткою крові була позитивною у 7 спостереженнях (3,1 %).
На нашу думку, реакція подвійний микродиффузии в агарі є цілком об'єктивною для вирішення питання щодо можливої сенсибілізації. У всіх випадках збігу позитивної реакції з сироваткою крові та слизу цервікального каналу у жінок (32 випадки), а також при визначенні ( + ) проби з сироваткою крові у чоловіків (7 випадків) ми вважали, що, мабуть, є сенсибілізація організму насіннєвими нитками.
При цьому стані ми могли чітко і об'єктивно констатувати утворення зон преципітації між антигеном в центрі препарату і розчинами по його периферії (рис. 20, 21, 22 і 23).
