Для діагностики наявності антитіл запропоновано велику кількість серологічних реакцій. Серед них гідне місце займає метод преципітації в агарі (реакція подвійний микродиффузии), який дозволяє проводити аналіз складного набору розчинних антигенів і прецепитирующих антитіл. При цьому відбувається осадження антигену - преципитиногена під впливом специфічного антитіла - преципитина. Дана реакція вперше описана Kraus (1897). Модифікацією реакції преципітації є дифузійна преципітація в гелі - один з найбільш чутливих методів дослідження антигенного складу різних речовин. Перебуваючи в напіврідкому речовині (агарі), антиген і антитіло дифундують один до одного з різною швидкістю і з'єднуються в певних місцях, утворюючи зони преципітації. Кожна з цих зон відповідає лише певному комплексу антиген - антитіло. Вперше ця методика була розроблена Oudin (1946), а в подальшому модифікована поруч дослідників.
Д. М. Гольбфарб і Л. Д. Замчук (1968), використовуючи метод преципітації в гелі при вивченні імунології нуклеїнових кислот, приходять до висновку, що за допомогою цієї реакції можна констатувати антитіла навіть при невеликому їх титрі.
Ми користувалися методом подвійної дифузії в агар за Ouchterlony (1948) в деякому видозміні. Стандартне предметне скло ретельно миють, висушують і оберігають від пилу. Перед використанням скла покриваються агаром шляхом занурення їх у 1% розчин. Покриті подібним способом предметні скла просушують на повітрі, вільному від пилу.
Агар бажано готувати для одного або принаймні для декількох дослідів, так як постійне його підігрівання змінює фізико-хімічні властивості. У своїй роботі ми користувалися звичайним агаром, який попередньо очищали: 20 г сухого агар-агару замочують в 1 л дистильованої води, розігрівають на вогні і додають 50 мл 10% розчину хлористого кальцію. Випав осад видаляють. Агар розливають у скляну посуд шаром товщиною 1 см і після висихання розрізають на квадрати з довжиною сторони 0,5-1 см Після промивання проточною (48 годин), а потім дистильованою водою (24 години зі зміною не менше 3-4 разів) агар віджимають від води, розігрівають на киплячій водяній бані і фільтрують через паперовий фільтр 3 рази. До готового гарячого аґару додають рівний об'єм 1,8% розчину хлористого натрію і мертиолата (1:10 000), потім розливають у стерильні пробірки. Перед застосуванням агар розігрівають на киплячій водяній бані і охолоджують до 60-70°. Приготований таким чином агар є 1% розчином і володіє хорошою прозорістю.
Після висушування скла з нанесеним агаром на них приклеюють в два шари дві смужки синтетичної ізоляційної стрічки. Ширина стрічки 13-15 мм, відстань між смужками 20 мм. Приклеєні стрічки служать для підтримування покривного скла на частку міліметра над предметним. Покривне скло поміщають на стрічки. Під нього тонкою скляною стерильною піпеткою вводять стільки 1% розчину агару, щоб заповнити весь простір між склом (покривним і предметним). Якщо агару мало, то не буде контакту його з покривним склом. Краще ввести більше розчину, щоб агар піднявся з криниць покривного скла, а потім з центральної лунки видаляти надлишки тієї ж скляною піпеткою до тих пір, поки агар не зрівняється з основою скошеної частини колодязя.
Підготовлені за даною методикою скла поміщаються в чашки Петрі, куди кладуть нарізані шматочки марлі. Витримування в чашках виробляють до висихання агару (10-15 хвилин). Покривне скло (Katsh, 1967) являє собою квадрат зі сторонами 25 мм, товщиною до 3 мм, в якому є 5 колодязів. Останні мають верхню круглий отвір діаметром 4 мм, глибиною 2 мм. Потім йде скіс 120°. Діаметр основи 1,35 мм, глибина 0,5 мм. Один з колодязів розташований в центрі, а інші на 12-3-6 і 9 годин. Відстань між центрами колодязів 5 мм (рис. 18 і 19). Wadsworth (1957), користуючись описуваної тут методикою, пропонує подібне скло з 6 колодязями. Можна працювати без спеціального покривного скла. Агар наливають на скляну пластинку і після застигання роблять спеціальними штампами в ньому лунки (колодязі).
