Мікробіологічна діагностика анаеробної інфекції полягає у виділенні з досліджуваного матеріалу збудника [Cl. perfringens, Cl. oedematiens, Cl. septicum, Cl. histolyticum та ін (рис. 1-8)] та його ідентифікації шляхом вивчення морфологічних, культуральних, біохімічних, токсигенних властивостей.
Для дослідження від хворого беруть шматочки уражених тканин, рідина, витягнуту шприцом з ранової зони, і кров з вени (5-10 мл). Трупний матеріал (виділення рани, шматочки змінених тканин, кров із серця, шматочки печінки і селезінки) слід брати не пізніше 5-6 годин після смерті, щоб виключити посмертне обсіменіння органів і тканин.
З усіх матеріалів готують мазки або мазки-відбитки і забарвлюють їх за Грамом. Наявність у мазку великих грампозитивних паличок із закругленими кінцями служить орієнтовним ознакою анаеробної інфекції.
Тканини, розтерті в ступці з дотриманням правил асептики і розведені рівним об'ємом фізіологічного розчину, і рідкі матеріали ділять на дві однакові частини: одну прогрівають 15 хв. при t° 80°, інший - залишають ненагретой. З обох порцій роблять посів на рідкі м'ясні або казеїнові середовища збагачення під вазеліновим маслом з 1 % розчином глюкози, прокип'ячені протягом 15 хв., і на щільні диференційно-діагностичні середовища (кров'яний та бензидиновый агары, середовище Вільсона - Блера, Віліса і Хоббс). Посіви на рідкі і напіврідкі середовища інкубують у звичайному термостаті, чашки з твердими середовищами поміщають в мікро - або макроанаэростат.
Посіви вирощують протягом 1-4 діб при t° 37°. Зростання і максимум токсинообразования у Cl. perfringens спостерігаються через 6-18 год., у Cl. oedematiens - через 48-96 год., у Cl. septicuni і Cl. histolyticum - через 20-36 годину. Виросли культури микроскопируют і при виявленні грампозитивних паличок перевіряють на наявність токсину в реакції нейтралізації. Для цього у 5 пробірок вносять по 0,9 мл центрифугата досліджуваної культури, в перші чотири пробірки додають по 0,6 мл однією з антитоксичних сироваток (антиперфрингенс, антиэдематиенс, антисептикум або антигистолитикум) з титром 100 АЕ в 1 мл, в останню, контрольну, пробірку додають 0,6 мл фізіологічного розчину. Суміші витримують 40 хв. при кімнатній температурі, після чого вводять з кожної пробірки по 0,5 мл внутрішньовенно або підшкірно двом білим мишам. Для морських свинок доза матеріалу повинна бути збільшена в 2-4 рази або зменшена до 0,2 мл при внутрішньошкірному введенні. Тварини, які отримали суміш токсину з гомологічною сироваткою, залишаються живими при загибелі інших або у них не спостерігається некрозу шкіри при внутрішньошкірному введенні. Сироватка, нейтрализовавшая токсин, вказує на видову приналежність перебуває у досліджуваному матеріалі мікроба.
У деяких випадках, коли з рани виділяється велика кількість ексудату, ставлять реакцію нейтралізації з центрифугатом ранового ексудату.
Паралельно з дослідженням на наявність токсину виросли культури пересівають на щільні поживні середовища, зазначені вище, і інкубують при t° 37° в анаеробних умовах. Подальший аналіз посівів на щільних середовищах аналогічний і полягає у виявленні колоній, що викликають гемоліз на кров'яному, агарі, почорніння на середовище Вільсона - Блера і на бензидиновом агарі, опалесценцию або просвітлення на середовищі Віліса і Хоббс. З колоній, типових для збудників анаеробної інфекції, виділяють чисті культури, які потім ідентифікують за морфологічними, тінкториальними, культуральним, антигенними та токсигенний властивостями.
Тривалість описаних досліджень зазвичай змушує вирішувати питання про лікувальних заходах, не чекаючи достовірного мікробіологічного діагнозу анаеробної інфекції. Останній враховують головним чином при післяопераційному лікуванні.
Рис. 1. Cl. perfringens А. (Х 1800). Рис. 2. Колонії Cl. perfringens А. на кров'яному агарі оточені зоною гемолізу. Рис. 3. Cl. oedematiens (X 1000). Рис. 4. Спори Cl. oedema-tiens в піску (X 1800). Рис. 5. Колонія Cl. oedematiens на печінковому агарі (х 32). Рис. 6. Cl. septicum у вигляді довгих ниток в печінці загиблої морської свинки (X 1800). Рис. 7. Cl. histolyticum (X 1900). Рис. 8. Колонії Cl. septicum на печінковому агарі через добу після посіву (х 32).
